| 研究課題/領域番号 |
04806045
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
基礎獣医学
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| 研究機関 | 富山医科薬科大学 |
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研究代表者 |
山本 博 富山医科薬科大学, 動物実験センター, 助教授 (00108797)
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| 研究分担者 |
見上 彪 東京大学, 農学部, 教授 (20091506)
中村 政美 富山医科薬科大学, 動物実験センター, 教務職員 (50186441)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1993年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1992年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | ネコ免疫不全ウイルス / T細胞株 / 細胞性免疫 / 抗体 / ELIZA / Netural Killer細胞 / PCR / 組み換えウイルス / 細胞障害性リンパ球(CTL) / Natural Killer細胞 / 組み換えワクシニアウイルス / ポリメレース チェイン リアクション |
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| 研究概要 |
1.ネコの免疫不全ウイルス(FIV)感染ネコの作製
(1)クリーンネコ(FIVに対する特異抗体が-であることを確認した)に東大より分与されたTM-2株を腹腔内接種して、FIV感染ネコを作製した(感染ネコ4匹、コントロールネコ2匹)。接種ウイルス(FIV)は、MYA-1株によってウイルスを増殖したものを用いた。
(2)FIVの感染の確認は、(1)FIV投与後1カ月および2カ月後に採血してELIZAにより特異抗体の産生を調べて確認した。(2)ネコの抹消血リンパ球(PBMC)をLymphoprepにより分離し、ConAで刺激して増殖させたPBMCよりDNAを抽出して、PCRにより感染の確認を行った。
2.^<51>Cr release assayの標的細胞作製
細胞性免疫能を^<51>Cr release assayを利用した細胞障害性リンパ球(CTL)の活性を測定により行った。そのために、標的細胞(ターゲット)となる細胞を個々のネコについて作製した。次に2つの方法によってターゲット用の細胞を作製した。(1)ConAによって刺激した細胞をIL-2加培地で培養する方法。(2)HTLY-1によってネコリンパ球をトランスフォームさせてCell Line(TLCL)を作る方法を用いた。
3.^<51>Cr release assay
(1)個々のネコのT細胞株(TLCL)におけるFIV(TM-2株)の増殖性を調べた。
(2)TM-2株がTLCLで増殖することがわかったので、^<51>Cr release assayにおける陽性target cellとして使用できることが明らかになった。
(3)そこでTM-2感染TLCLをtargetとして、freshおよびConA刺激ネコPBLを用いてFIV特異的細胞性免疫活性を調べたが、活性は弱かった。
(4)また、FIV感染ネコおよびコントロールネコPBLの活性を比較した。
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