| 研究課題/領域番号 |
04836011
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
老化(加齢)
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
淺野 仁子 京都大学, 医療技術短期大学部, 教授 (10028392)
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| 研究分担者 |
淺野 朗 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (30029938)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1993年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1992年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | ミトコンドリアDNA / 加齢 / LINE / 制限食 / 自由食 / 心筋 / 大脳 / 小脳 / ビオチン化DNAプローブ / ヌクレアーゼ |
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| 研究概要 |
今年度は引き続き、ミトコンドリアDNA(mtDNA)と核DNA(nDNA)の量比の加齢に伴う変動をラットの各組織を対象に行った。測定をより正確に行うため、内部標準としてnDNAに存在する高度繰り返し配列"LINE"を用いる事とした。LINE配列のうち、制限酵素SalIとPstIで切り出される2kbpの断片に対応するプローブを合成しビオチン化した(プローブN)。ラットの種々の組織から野精製DNAをEcoRI,SalIとPstIで消化したものをサザンブロッドし、mtDNAのプローブとプローブNを同時に加えてハイブリッドさせる。このようにするとビオチン化プローブの発色の程度は、mtDNAとnDNAに対するものが同時に測定できる程度なので、この発色強度の比をmtDNA/nDNAの値とした。mtDNAプローブの方はLINEの2kbpと分離の良いEcoRIのA断片(62kbp)に対応するプローブを用いることにした。
心筋では、前年度までに24ヶ月齢で減少が認められていたが、30ヶ月齢も測定した。その結果、肝と同様に30ヶ月齢では2ヶ月齢の30%以下となっていた。また、これまでの実験は餌を60%に制限したラット群の値であったが、自由食の群と比較し、餌の効果を調べた。その結果、肝臓では制限食の場合と同様にmtDNA/nDNAの量比は加齢と共に減少した。心筋では、この比の減少は少なくなった。腎臓では逆に、制限食の時は減少せず、自由食の方は減少傾向を示した。さらに、自由食ラットの脳についてmtDNA/nDNAの量比を測定した結果では、大脳では減少が認められたが、小脳を含む部分では減少しなかった。
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