ヒトの上皮系培養細胞を用いた発癌研究

• 研究課題/領域番号: 05151068
• 研究種目: がん特別研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: (財)癌研究会
• 研究代表者: 野田 哲生 財団法人癌研究會, 癌研究所・細胞生物部, 部長 (10183550)
• 研究分担者: 増井 徹 財団法人癌研究會, 癌研究所・ウイルス腫瘍部, 研究員 (50150082) ; 許 南浩 東京大学, 医科学研究所, 助手 (70173573) ; 清水 素行 鳥取大学, 医学部, 助教授 (80130756) ; 澤田 典均 札幌医科大学, 医学部, 講師 (30154149) ; 難波 正義 岡山大学, 医学部, 教授 (80069004)
• 研究期間 (年度): 1993
• 研究課題ステータス: 完了 (1993年度)
• 配分額: 15,000千円 (直接経費: 15,000千円); 1993年度: 15,000千円 (直接経費: 15,000千円)
• キーワード: ヒト上皮細胞 / TGFbeta / myc遺伝子 / 子宮頚癌 / ヒトケラチノサイト

研究概要

本研究は、ヒト多段階発癌における種々の遺伝子変異の役割の解析に応用可能な、培養細胞を用いての実験系の開発を目的としており、具体的にはヒト細胞の初代培養、三次元培養系、染色体移入法、ジーンターゲティング法等の異なった分野の専門家を結集し、【.encircled1.】種々の上皮系培養系の確立、【.encircled2.】その培養細胞系に応用可能な遺伝子操作法の開発、【.encircled3.】この培養系を用いての発癌過程の解析に有用な、上皮細胞の変化を反映したパラメーターの開発等を行って来た。
本研究の平成5年度における成果の中で特に注目すべきものは以下の3つである。1.ヒト子宮頚部発癌諸段階より樹立した約20種の培養細胞系を用いた解析から、ヒト扁平上皮癌が生理的増殖阻害因子(TGFbeta及びレチノイド)に対して抵抗性を示すステップを同定した。特にTGFbetaに対する応答性に関しては、myc遺伝子の発現低下を指標として、この応答性の喪失が微小浸潤癌から浸潤癌へと進展する段階で生じることが同定され、さらにこうしたmyc遺伝子の発現低下が見られなくなった浸潤癌由来の細胞でも、TGFbetaに反応してJunBの発現増加が観察されることから、この応答性の喪失は従来から考えられていた受容体レベルのものではないという重要な知見が得られた。2.SV40大型T抗原を用いて各種ヒト上皮細胞を不死化することに成功した。3.高発癌性遺伝疾患である色素性乾皮症患者からケラチノサイト細胞株の樹立に成功した。
上記の成果以外にも、当初の目的は概ね計画通りに進行しており、特に上記の2.3.を始めとして、より正常に近いヒト上皮由来細胞株が次々と得られて居り、当初の計画通り、これらの細胞株の性状の解析やこれらの細胞株に対する遺伝子操作を行うことにより、ヒトがんの特性に関する研究の進展が期待される。

研究成果

• [文献書誌] Jahan,I.,et al.: "Neoplastic transfomation and charactarization of human fibroblasts by treatmemt with ^<60> Co gamma rays and the human c-ha-ras oncogene." In Vitro Cell.Dev.Biol.29. 763-767 (1993)
• [文献書誌] Endo,A.,et al.: "Alteration in the retino-blastomna gene associated with immortalization of human fibroblasts treated with ^<60> Co gamma rays." J.Cancer Clin.Oncol.119. 522-526 (1993)
• [文献書誌] Miyazaki,M.,et al.: "Immortalization of epithelial-like cells from human liver tissue with SV-40 T-antigen gene." Exp.Cell Res.206. 27-35 (1993)
• [文献書誌] Huh,N.,et al.: "Isolation and characterization of a novel hair follicle-specific gene,hacl-1." J.Inv.Dermotol.in press.
• [文献書誌] Kuroki,T.,et al.: "Why are human cells resistant to malignant cell transfomation in vitro?" Jpn.J.Cancer Res.84 in press.
• [文献書誌] Kang,H.,et al.: "A highly sensitive and specific method for quantitation of O-alkylated DNA adducts and its application to the analysis of human tissue DNA." Environm.Helth Persp.99. 269-271 (1993)
• [文献書誌] Chiba,H.,et al.: "Establishment and characterization of an SV-40-immortalized osteoblastic cell line from normal human bone." Jpn.Cancer Res.84. 290-297 (1993)
• [文献書誌] Kamimura,Y.,et al.: "Endothelin-1 induces contraction of bile canaliculi in isolated rat hepatocytes." Biochem Biophysic Res Communic.191. 817-822 (1993)
• [文献書誌] Ohmura,T.,et al.: "Establishment of a novel monoclonal antibody SE-1 which specifically reacts with rat hepatic sinusoidal endothelial cells." J.Histochem.Cytochem.41. 1253-1257 (1993)
• [文献書誌] Sakamoto,H.,et al.: "High sensitivity of LEC rats with chronic hepatitis to hepatocarcinagenesis:decrease in unscheduled and replicative DNA synthesis of the hepatocytes." Jpn.Cancer Res.84. 966-971 (1993)
• [文献書誌] Satoh,H.,et al.: "Human mammary epithelial cells undergo squamaus differentiation in serum-free three-dimentional culture upon loss of growth activity." Cell Struct Funct. in press.
• [文献書誌] Mori,M.,et al.: "The LEC rat:A model for human hepatitis,liver cancer,and much more." Am.J.Pathol.144. 200-204 (1994)
• [文献書誌] Chiba,H.,et al.: "Relationship between the expression of the gap junction protein and osteoblast phenotype in a human osteoblastic cell line during cell proliferation." Cell Stuct.Funct.in press.
• [文献書誌] Chiba,H.,et al.: "A newly establishd cell line from normal human bone responses to la,25-dihydroxyvitamin D3,retinoic acid and transforming growth factor-beta1." Tumor Res.in press.
• [文献書誌] Isomura,H.,et al.: "An increase in portal flow induces c-myc expression in isolated prefused rat liver." J.Cell.Physiol.154. 329-332 (1993)
• [文献書誌] Zhong,Y.,et al.: "Monoclonal antibody 7H6 reacts with a novel tight junction-associated protein distinct from ZO-1,cingulin and ZO-2." J.Cell Biol.120. 477-483 (1993)
• [文献書誌] Yoshida,M.A.,et al.: "In vitro growth suppression and morphological change in a human renal cell carcinoma cell line by the introduction of normal chromosome 3 via microcell-fusion." Mol.Carcinogen.in press.
• [文献書誌] Kohno,T.,et al.: "Deletion mapping of chromosome 3p in human uterine cervical cancer." Oncogene. 8. 1825-1832 (1993)
• [文献書誌] Kurimasa,A.,et al.: "A human gene that restores the DNA-repair defect in SCID mice is located on 8p11.1→q11.1." Hum.Genet.in press.
• [文献書誌] 増井 徹: "正常ヒト気管支上皮細胞の培養系における扁平上皮分化の研究" 呼吸. 12. 176-180 (1993)
• [文献書誌] Taniguchi,A.,et al.: "A cell-type specific transcription enhancer of type 16 human papillomavirus(HPV 16)p97 promoter is defind with HPV-associated cellular events in human epithelial cell lines." Virology.195. 500-510 (1993)
• [文献書誌] Tsutsumi,K.,et al.: "In vitro and in vivo analysis of cellular ogirin of cervical squamous metaplasia." Am.J.Pathol.143. 1-9 (1993)
• [文献書誌] Tanaka,T.,et al.: "Analysis of differentiation of the tat myelomonocylic leukemia cell line(WRT-7)cultured with rat bone marrow preadipocyte cell line(REC-A16)in vitro." J.Cancer Res.&Clinical Oncol.in press.
• [文献書誌] Harada,H.,et al.: "Generation of monoclonal antibody E6G12 that specifically reacted to cell surface antigen as a nove differentiation marker of human stratified squamous epithelia and spuamous cell carcinoma." J.Oral Pathol.Med.22. 145-152 (1993)