| 研究概要 |
本研究の目的は,Ca^<2+>イオンを中心とした輸送系タンパク質群の構造とその共役ネットワークを酵母(Saccharomyces cerevisiae)を用いて明らかにすることである.前年度までに,酵母の性フェロモンによって誘導されるCa^<2+>の流入に欠損をもつ突然変異株mid1およびCa^<2+>の受容に欠損をもつと考えられる突然変異株mid2の解析を行い,MID1遺伝子産物(Mid1p)は種々のイオンチャンネルの膜貫通ドメインと相同な領域をもつこと,およひMID2遺伝子産物(Mid2p)は動物のalpha-ラクトアルブミンのCa^<2+>結合領域と相同な領域をもつことを明らかにしている.本年度は,Mid1pの細胞内局在部位と機能ドメインの同定,およびMid2pのCa^<2+>結合能の研究を行った.その結果,Mid1pは形質膜に貫通して存在すること,およびMid1pのC-末端ドメインは栄養増殖には必要ないが,性フェロモンの作用を受けたときのCa^<2+>流入に重要であることを明らかにした.Mid1pは既知のイオンチャネルと相同性はないが,唯一その膜貫通ドメインが他のイオンチャンネルの膜貫通ドメインと相同であることから,Mid1pは形質膜上でCa^<2+>チャネルの構成成分またはレギュレータとしてはたらくものと考えられる.Mid2pは大腸菌で大量生産し,部分精製し,^<45>Ca^<2+>を結合することを示した.前年度に,Mid2p遺伝子は多コピーでも低コピーでもmid1変異を抑圧できるが,MID1遺伝子はたとえ多コピーでもmid2変異を抑圧できないことを示している.したがって,Mid2pはMid1pによって流入したCa^<2+>を受け取る機能を果たしていると考えられる.
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