| 研究課題/領域番号 |
05268232
|
|---|
| 研究種目 |
重点領域研究
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究機関 | 札幌医科大学 |
|---|
研究代表者 |
渡辺 直樹 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (10158644)
|
|---|
| 研究分担者 |
新津 洋司郎 札幌医科大学, 医学部, 教授 (10045502)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1993
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1993年度: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
|
|---|
| キーワード | Heat Shock Protein(HSP) / Tumr Necrosis Factor(TNF) / Endogenous TNF / Heat Shock Factor(HSE) / Heat Shock Element(HSE) |
|---|
| 研究概要 |
これまで我々は、細胞内に存在するTNFがantioxidant enzyme(MnSOD)の誘導を介し、熱ショック、ある種の抗癌剤(Doxorubicin)や外から加えられたTNF自身(外因性TNF)などの細胞ストレスに対し、防御因子として働いていることを見い出してきた。しかし、細胞内TNFと熱ショック蛋白質(HSPs)など他のストレス応答系との相互関係は、いまだ不明であった。そこで本研究では、細胞内TNFがHSPsの発現に及ぼす影響およびその分子機構について検討した。
HSP72産生の誘導に与える細胞内TNFの影響を、35S-メチオニンでパルスラベルした非分泌型TNF発現ベクター(pTNFDELTApro)およびantisense TNF mRNA(PLJ-anti TNF)導入細胞のcell lysateを、抗HSP72抗体で免疫沈降後、SDS-PAGE、autroradeiographyし解析したところ、L-M(pTNFDELTApro)細胞のHSP72発現量は、37℃ではL-M細胞と差はなかったが、加温(42℃,1時間)
後には、L-M細胞の約3倍に増加した。一方、HeLa細胞では、antisense TNF mRNAの導入により、加温時におけるHSP72の発現が抑制された。
さらに、熱ショック時における各細胞のcytosolに存在するHSF(heat shock factor,HSPsの転写因子)の、HSE(heat shock element,HSPsのプロモーター領域の共通配列)に対する結合性を、32Pでラベルした合成HSEを用いたゲルシフト解析で検討したところ、L-M(pTNFDELTApro)細胞では親細胞に比べ著明に上昇していた。一方、HeLa細胞ではantisense TNF mRNA導入により、HSFのHSE結合性は明らかに低下していた。
すなわち、細胞内TNFは、熱ショック時においてHSFのHSEに対する結合性を高めることにより、HSP72の発現を増強することが示唆された。
|
