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大腸菌アルキル化DNA修復酵素の三次元構造と機能

研究課題

研究課題/領域番号 05270209
研究種目

重点領域研究

配分区分補助金
研究機関大阪大学

研究代表者

山縣 ゆり子  大阪大学, 薬学部, 助手 (40183678)

研究期間 (年度) 1993
研究課題ステータス 完了 (1993年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1993年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
キーワードDNA修復酵素 / 3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼ / Ada蛋白 / X線結晶構造解析
研究概要

大腸菌には、強力な突然変異、致死作用を有するアルキル化剤によるDNAの損傷に特異的に働くDNA修復酵素が3種(3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼIとII、およびAda蛋白)存在する。本研究の最終目的は、X線結晶構造解析法でこれら蛋白質の3次元構造を決定し、それぞれのアルキル化DNA塩基の認識機構、酵素反応機構を原子レベルで解明することであり、本年度はそれぞれの蛋白質について、以下の研究成果を得た。
〈3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼII〉
X線構造解析に適した結晶を得、2.0A分解能のX線回折強度データを精度良く測定した。立体構造既知の関連蛋白質がない場合、重原子同型置換法で構造解析を進めるため、重原子同型結晶の探索を行なったところ、水銀、白金、金、イリジュウム化合物が、構造解析に有効であることが判明した。それぞれの誘導体結晶のX線回折データを測定し、多重同型置換法を用いて解析、2.8A分解能の電子密度図作成に成功した。電子密度図から、本蛋白質は5本のβ鎖からなるβ-シートと約10本のα-ヘリックスで構成される新しいα+β構造をとっていることが明らかとなった。
〈3-メチルアデニンDNAグリコシラーゼI、Ada蛋白〉
両蛋白質を大腸菌中で大量産生させ、純度良く精製し、X線解析に適した結晶を作成するため結晶化条件を種々検討し、両者共に結晶を得たが、X線回折実験を行なうにはまだ小さい。

報告書

(1件)
  • 1993 実績報告書
  • 研究成果

    (5件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (5件)

  • [文献書誌] M.Otsuti et al.: "Structure of p-Isopropylcalix(4)arene-Toluene(1:1)Complex" Acta Crystallographica. C49. 639-641 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] M.Yamaki et al.: "Blespirol,A Phenanthrene with a Spirolactone Ring from Bletilla Striata" Phytochemistry. 33. 1497-1498 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Yamagata et al.: "Conformation of 3-Substituted Purine Nucleoside Studied by X-ray Crystallography and Theoretical Calculations" Nucleosides & Nucleotides. (in press). (1994)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] S.Fujii et al.: "Novel Molecular Conformation of(R,S)-Hesperetin" Chem.Pharm.Bull.(in press). (1994)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] I.Terashima et al.: "Demethylation of O^6-Methlguanine in DNA by O^6-Methylguanine-DNA Methyltransferase:Synthesis and Chracterization of O^6,9-Dimethylguanine that is Coordinated with cis-Platin at N7-Position" Chem.Pharm.Bull.(in press). (1994)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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