| 研究課題/領域番号 |
05273221
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| 研究種目 |
重点領域研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究機関 | 国立遺伝学研究所 |
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研究代表者 |
上田 均 国立遺伝学研究所, 遺伝実験生物保存研究センター, 助手 (60201349)
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| 研究分担者 |
広瀬 進 国立遺伝学研究所, 個体遺伝研究系, 教授 (90022730)
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| 研究期間 (年度) |
1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1993年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 脱皮ホルモン / シス-エレメント / 遺伝子発現制御 / 時期特異的遺伝子発現 / 標的遺伝子 / メディエーター / In vitro転写系 |
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| 研究概要 |
脱皮ホルモンのパルスで誘導されるFTZ-F1の時期特異的発現を規定するシス-エレメントを解析するため、転写開始点付近を含む4.2kbのゲノムDNA断片をレポーター遺伝子に結合させた融合遺伝子を作成し、P因子を介した遺伝子導入法でハエ導入した。前蛹期におけるレポーター遺伝子産物を組織化学的に解析したところ、得られた3系統すべてにおいて、成虫原基、気管、表皮などで、内在性のFTZ-F1の発現している時期に特異的に発現がみられ、少なくともこれらの組織での発現のためのシス-エレメントが、4.2kb以内に存在すると考えられた。
ショウジョウバエのEDG84A遺伝子は、FTZ-F1が発現する時期に特異的に発現し、しかも転写開始点付近にFTZ-F1結合部位を有する。そこで、熱ショックプロモーターにFTZ-F1のcDNAを結合した融合遺伝子を有するハエを作成し、内在性のFTZ-F1が発現していない時期に熱ショックを与えてFTZ-F1を発現させ、EDG84AmRNAが誘導されるか調べた。その結果、時期に制限があるが誘導されることが明かとなり、EDG84A遺伝子は、FTZ-F1の標的遺伝子であること、さらにFTZ-F1以外の因子によって発現が抑制されると推定された。
Hela抽出液In vitro転写系を用いてFTZ-F1(BmFTZ-F1)がfushi tarazu(ftz)遺伝子の転写にポジティブに働く機構を解析する程度で、18kdと22kdの因子がメディエーターの活性を有することを明らかにし、それぞれMBF1とMBF2と名付けた。BmFTZ-F1、MBF1、MBF2、hTBPの4者間の相互作用を調べたところ、BmFTZ-F1は、MBF1とMBF2の両者を介してhTBPと結合することが明らかになった。この結果は、In vitro転写系で、BmFTZ-F1によるftz遺伝子の転写活性化にはMBF1とMBF2の因子の両方が必要であるという以前の結果と一致し、BmFTZ-F1による転写活性化にはMBF1とMBF2を介したBmFTZ-F1とTBPの相互作用が必要であることが示唆された。
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