| 研究課題/領域番号 |
05453163
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用微生物学・応用生物化学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
室伏 旭 東京大学, 農学部, 教授 (00011916)
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| 研究分担者 |
中嶋 正敏 東京大学, 農学部, 助手 (50237278)
鈴木 義人 東京大学, 農学部, 助手 (90222067)
山口 五十麿 東京大学, 農学部, 助教授 (00012013)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
7,300千円 (直接経費: 7,300千円)
1995年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1994年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1993年度: 4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
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| キーワード | ジベレリン / 抗ジベレリン抗体 / 一本鎖抗体 / トランスジェニックタバコ / トランスジェニック タバコ / 抗ジベレリン抗体遺伝子 / scFv / 植物の形質転換 |
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| 研究概要 |
抗ジベレリンA4(GA4)抗体の一本鎖抗体(scFV)遺伝子を構築し、E.coliを形質転換してscFVを作らせた。scFVは、不溶性の沈殿として回収された。そこで、これを尿素で変性させて可溶化し、再構成を試みたが大部分は沈殿となり可溶化のscFVは得られなかった。得られたscFVを懸濁し、トリチウム標識GA4との結合性を検定したところ、微弱ながらscFVの量に依存した結合が認められた。
先のscFVをバイナリーベクターを用いるアグロバクテリウムの系によりタバコに導入し、形質転換されたカルスを得た。これをオーキシン、サイトカイニンを含む培地で培養し、再分化を行わせ、10この再分化個体を得た。再分化個体のmRNAを抽出し、ノーザンハイブルダイゼーションを行ったところ、いずれの個体からもscFVをコードしているDNAとハイブリダイズするバンドを認め、scFV遺伝子が導入されたことを確認した。
形質転換した植物体の培養を続けているが、期待される矮化等の明瞭な形質は発現していない。今後、ウエスタンブロティングによりscFVが植物体内で生産されているか否か検定する予定である。
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