研究課題/領域番号 |
05453211
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研究種目 |
一般研究(B)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
機能生物化学
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研究機関 | 大阪大学 |
研究代表者 |
長谷 純宏 大阪大学, 理学部, 教授 (80028232)
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研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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配分額 *注記 |
7,400千円 (直接経費: 7,400千円)
1994年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1993年度: 5,700千円 (直接経費: 5,700千円)
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キーワード | マンノシダーゼ / 糖鎖 / コバルトイオン / ニワトリ / ピリジルアミニ化法 / ピリジルアミノ化法 / 基質特異性 / 酵素 |
研究概要 |
細胞内には中性α-マンノシダーゼを始めといて種々の糖水解酵素の存在が知られている。その中で、細胞質に含まれるα-マンノシダーゼの精製や詳細な基質特異性についてはほとんど報告が無く、その役割もはっきりしていない。そこで我々は細胞質の中性α-マンノシダーゼの役割を解明するためウズラ輪卵管より中性α-マンノシダーゼを精製し(奥ら1991)基質特異性を調べた結果、この酵素は他のα-マンノシダーゼと比し極めて特異な水解様式を示す事が明らかとなった。この特異な水解様式より、この酵素は糖蛋白質のエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼの水解産物(糖鎖部分)を基質としており、糖鎖の異化が行なわれているとされているリソソームとは明らかに異なった、新しい糖鎖の代謝過程の存在が初めて明らかにされた(奥、長谷1992)。本研究では、量多く得られるニワトリの輸卵管より同様の酵素を精製し、コバルト(II)イオンによる活性の発現機構を解明しようとするものである。 平成5年度ではニワトリ輸卵管より本酵素を精製し、その至過pHやコバルト(II)イオンによる活性化等を調べ、多種類のPA糖鎖を用いて基質特異性の解析を行ない、ウズラよりの酵素とほぼ同様である事を確認した。平成6年度では、得られたα-マンノシダーゼの活性化におけるコバルト(II)イオンの濃度依存性やその時のpH依存性を調べた。本酵素におけるプロテアーゼの関与えを、コバルト(II)イオン活性化前後で、種々のペプチド合成基質を用いて調べ、また酵素の活性化の阻害をプロテアーゼ阻害剤を用いて調べた。これらの結果より、本酵素の活性化にはプロテアーゼの関与が示唆された。しかし、活性化の前後で本酵素の分子量に変化があるか否かをSDSPAGEで調べたが、明瞭な変化は見られなかった。今後は酵素の構造解析などさらに詳細な研究が必要である。
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