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食品中のコレステロール分解を目的とした優良細菌群の育種研究

研究課題

研究課題/領域番号 05454073
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 応用微生物学・応用生物化学
研究機関大阪大学 (1995)
広島大学 (1993-1994)

研究代表者

室岡 義勝  大阪大学, 大学院・工学研究科, 教授 (60029882)

研究分担者 山下 光雄  大阪大学大学院, 工学研究科, 助手 (40220347)
研究期間 (年度) 1993 – 1995
研究課題ステータス 完了 (1995年度)
配分額 *注記
6,700千円 (直接経費: 6,700千円)
1995年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1994年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1993年度: 4,800千円 (直接経費: 4,800千円)
キーワードコレステロール分解 / 乳酸菌 / 遺伝子工学 / ベクター開発 / 形質転換 / 食品機能 / コレステロール / ステロイド分解 / 発酵食品 / 分子育種
研究概要

本研究は、伝統的な有用細菌種を育種するための効率の良い技術を開発し、コレステロールの分解能を付与した優良菌株を育種して、食品材料を処理し、食品中のコレステロール価の低減を目的とした基礎的研究を行おうとしたものである。本年度は以下のような研究を行った。
1。日本、インドネシア、フイリッピン、タイ、ネパール、ベトナムおよびエジプトの伝統的な醗酵食品よりさらにいくつかの乳酸菌株を分離した。
2。フイリッピンの発酵食品より分離した乳酸菌、Lactobacillus plantarumのプラスミドを解析した。L137株は1.8から60kbの大きさの15種のプラスミドを持っていた。これを薬剤処理により、8種類にキュアリングした株を宿主として検討した。また、この株の持つプラスミドを組み換え、2種類(pRN14,pRN96)のベクターを作成した。
3。乳酸菌への遺伝子導入のためのベクターの構築のため、広宿種グラム陽性菌ベクター(pSA3,pGK13)を用いて、乳酸菌株への効率的な遺伝子導入条件を、本研究補助金により購入した遺伝子導入装置を使用して検討した結果、L. plantarumに形質転換することに成功した。この条件を使用し、L. plantarumからのベクターも同菌株へ導入された。
4。乳酸菌への形質転換系ができたので、ついでコレステロール分解系の最初の遺伝子、コレステロール酸化酵素遺伝子(choA)を上記ベクターに挿入し、このベクターをL. plantarumに導入した。
5。乳酸菌内でのchoA遺伝子の発現量が低いため、プロモーターを種々置き換えて酵素活性量の増大を検討している。

報告書

(4件)
  • 1995 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1994 実績報告書
  • 1993 実績報告書
  • 研究成果

    (44件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (44件)

  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Bacterial cholesterol oxidases are able to act as flavoprotein-linked ketosteroid monooxygenases that catalyse the hydroxylation of cholesterol to 4-cholesten-6-ol-3-one." Molecular Microbiology. 7. 419-428 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Nucleotide sequence analysis of a region upstream of the cholesterol oxidase cytochrome P_<450> operon of Streptomyces sp. SA-COO revealing repeating units coding for putative transmembrane and DNA-binding proteins." Journal of Fermentation and Bioengineering. 76. 257-264 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Helix-turn-helix DNA-binding motifs of Streptomyces a cautionary note." Molecular Microbiology. 8. 783-787 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Molecular cloning,expression in Streptomyces lividans, and analysis of a gene cluster from Arthrobacter simplex encoding 3-ketosteroid-Δ^1-dehydrogenase,3-ketosteroid-Δ^5-isomerase,and a hypothetic regulatory protein." Molecular Microbiology. 15. 895-905 (1995)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wilmanska,Danuta: "Identification of cholesterol oxidase from fast-growing Mycobacterial strains and Rhodococcus sp." Journal of Fermentation and Bioengineering. 79. 119-124 (1995)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nomura,Nobuhiko: "Genetic modification of the Streptomyces cholesterol oxidase gene for expression in Escherichia coli and development of promoter-probe vectors for use in enteric bacteria." Journal of Fermentation and Bioengineering. 79. 410-416 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Choi,Kwang-Pil: "Secretory overproduction of Arthrobacter simplex 3-ketosteroid-Δ^1-dehydrogenase by Streptomyces lividans with a multicopy shuttle vector." Applied Microbiology and Biotechnology. 43. 1044-1049 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Choi, Kwang-Pil: "Purification and charactrization of the 3-ketosteroid-Δ^1-dehydrogenase of Arthobacter simplex clpned and produced in Strepromyces lividans." Journal of Biochemistry. 117. 1043-1049 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Cho,Hyonju: "Introduction and expression of the Streptomyces cholesterol oxidase gene (choA),a potent insecticid all protein active against ball weevil larvae into tobacco cells." Applied microbiology and Biotechnology. 44. 133-138 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Olympia,M: "Characterrization of starch hydrolyzing lactic acid bacteria isolated from a fermented fish and rice food,“Burong isda" and its amylolytic enzyme." Journal of Fermentation and Bioengineering. 80. 124-130 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 室岡義勝: "コレステロール酸化酵素-臨床検査薬から健康食品そして殺虫剤へ" バイオサイエンスとインダストリー. 54. 16-20 (1996)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Murooka,Yoshikatsu: "Recent advances in studies on Streptomyces cholesterol oxidase and gene clusters involved in steroid catabolism in prokaryotes." Activnomycetorogia. (in press). (1996)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar, I., Hayashi, N., Choi, K.-P., Yamamoto, H., Yamashita, M.and Murooka, Y.: "Bacterial cholesterol oxidases are able to act as flavoprotein-linked ketosteroid mono-oxidases that catalyse hydroxylation of cholesterol to 4-cholesten-6-o1-3-one." Molec.Microbiol.7 (3). 419-428 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar, I.and Murooka, Y.: "Nuceotide sequence analysis of a region upstream of the cholest-erol oxidase-cytochrome p450 operon of Streptomyces sp. SA-C00 revealing repeating units coding for putative trans-membrane and DNA-binding proteins." J.Ferment.Bioeng.76 (4). 257-264 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar, I.and Murooka, Y.: "Helix-turn-helix DNA-binding motifs of Streptomyces-a caution-ary note." Molec.Microbiol.8 (4). 783-787 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wilmanska, D., Dziadek, J., Sajduda, A., Miczarek, K., Jawoes-ki, A.and Murooka, Y.: "Identification of cholesterol oxidase from fast-growing mycobac-terial strains and Rhodococcus sp." J.Ferment.Bioeng.79 (2). 119-124 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nomura, N., Choi, K.-P., Yamashita, M., Yamamoto, H., and Murooka, Y.: "Genetic modification of the Streptomyces cholesterol oxidase gene for expression in Escherichia coli and development of promoter-probe vectors for use in enteric bacteria." J.Ferment.Bioeng.79 (5). 410-416 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Choi, K.-P., Molnar, I.and Murooka Y.: "Secretory overproduction of Arthrobacter simplex 3-ketosteroid DELTA1-dehydrogenase by Streptomyces lividans with a multi-copy shuttle vecter." Applied Microbiol.Biotechnol.43. 1043-1049 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Choi, K.-P., Molnar, I., Yamashita, M.and Murooka, Y.: "Purification and characterization of the 3-ketosteroid-DELTA1-dehydrogenase of Arthrobacter simplex produced in Streptomyces lividans." J.Biochem.117. 1043-1049 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Cho, H.-J., Choi, K.-P., Yamashita, M., Morikawa, H.and Murooka, Y.: "Introduction and expression of the Streptomyces cholesterol oxidase gene (choA) , a potent insectici-dal protein active against boll weevil larvae, into tobacco cells." Appl.Microbiol.Biotechnol.44. 133-138 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Olmpia, M., Ono, H., Knako, H., and Takano: "Characterization of starch hydrolyzing lactic acid bacteria isolated from a fermented fish and rice food、 "Burong isda" and its amylolytic enzyme." J.Ferment.Bioeng.80. 124-130 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Murooka, Y.: "A multi-useful enzyme, cholesterol oxidase" Bioscience and Bio-Industry. 54. 16-22 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Murooka, Y., Choi, K.-P., Molnar, I., Nomura, N., Cho, H.-J.and Yamashita, M.: "Recent advances in studies on Streptomyces cholesterol oxidase and gene cluster involved in steroid catabol-ism in prokaryotes." Actinomycetorogia. (in press). (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Molecular cloning,expression in Streptomyces lividans,and analysis of a gene cluster from Arthrobacter simplex encoding 3-ketosteroid-Δ^1-dehydrogenase,3-ketosteroid-Δ^5isomerase,and a hypothetic regulatory protein." Molecular Microbiology. 15. 895-905 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Wilmanska,Danuta: "Identification of cholesterol oxidase from fast-growing Mycobacterial strains and Rhodococcus sp." Journal of Fermentation and Bioengineering. 79. 119-124 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Nomura,Nobuhiko: "Genetic modification of the Streptomyces cholesterol oxidase gene for expression in Escherichia coli and development of promoter-probe vectors for use in enteric bacteria" Journal of Fermentation and Bioengineering. 79. 410-416 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Choi,Kwang-Pil: "Secretory overproduction of Arthrobacter simplex 3-ketosteroi-Δ^1-dehydrogenase by Streptomyces lividans with a multicopy shuttle vector." Applied Microbiology and Biotechnology. 43. 1044-1049 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Choi,Kwang-Pil: "Purification and characterization of the 3-ketosteroid-Δ^1-dehydrogenase of Arthrobacter simplex cloned and produced in Streptomyces lividans." Journal of Biochemistry. 117. 1043-1049 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Bacterial cholesterol oxidases are able to act as flavoprotein-linked keto steroid monooxygenases that catalyse the hydroxylation of cholesterol to 4-cholesten-6-o1-3-one" Molecular Microbiology. 7. 419-428 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Nucleotide sequence analysis of a region upstream of the cholesterol oxidase-cytochrome P450 operon of Streptomyces sp.SA-COO revealing repeating units coding for putative transmembrane and DNA-binding proteins" Journal of Fermentation and Bioengineering. 76. 257-264 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "IIelix-turn-helix DNA-binding motifs of Streptomyces-a cautionary note" Molecular Microbiology. 8. 783-787 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Molecular cloning,expression in Streptomyces lividans,and analysis of a gene cluster from Arthrobacter simplex encoding 3-ketosteroid-△1-dehydrogenase,3-ketosteroid-△5isomerase,and a hypothetic regulatory protein." Molecular Microbiology. (印刷中). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Choi,Kwang-Pil: "Secretory overproduction of Arthrobacter simplex 3-ketosteroi-△1-dehydrogenase by Streptomyces lividans with a multicopy shuttle vector." Appl.Microbiol.Biotechnol.(印刷中). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Choi,Kwang-Pil: "Purification and characterization of the 3-ketosteroid-△1-dehydrogenase of Arthrobacter simplex cloned and produced in Streptomyces lividans." Journal of Biochemistry. (印刷中). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Yoshikatsu: "Recombinant Microbes for Industrial and Agricultural Applications" Marcel Dkker,Inc.New York,U.S.A., 904 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Yoshikatsu: "Cucumis sativus I,.(Cucumcer):In vitro culture and the production of ascorbate oxisdase" Biotechnology in Agriculture and foresty Springer-Verlag Berlin lleidelberg, 15 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Bacterial cholesterol oxidases are able to act as flavoprotein-linked ketosteroid monooxygenases that catalyse the hydroxylation of cholesterol to 4-cholesten-6-ol-3-one" Molecular Microbiology. 7. 419-428 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Nucleotide sequence analysis of a region upstream of the cholesterol oxidase-cytochrome P450 operon of Streptomyces sp.SA-COO revealing repeating units coding for putative transmembrane and DNA-binding proteins" Journal of Fermentation and Bioengineering. 76. 257-264 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Helix-turn-helix DNA-binding motifs of Streptomyces - a cautionary note" Molecular Microbiology. 8. 783-784 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Molnar,Istvan: "Secretory production of homologous and heterologous proteins by recombinant Streptomyces:What has been accomplished?" Recombinant Microbes for Industrial and Agricultural Applications. 81-104 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Murakami,Katsuji: "Cloning and characterization of the gene encoding glutamate 1-semialdehyde 2,1-aminomutase,which is inlved in δ-aminolevulinic acid synthesis in Propionibacterium freudenreichii" Applied Environmental Microbiology. 59. 347-350 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Yamashita,Mitsuo: "Purification and characterization of monoamine oxidase from Klebsiella aerogenes" Journal of Fermentation and Bioengineering. 76. 289-295 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Yoshikatsu: "Biotechnology in Agriculture and foresty" Springer-Verlag Berlin Heidelberg, 15 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Murooka,Yoshikatsu: "Recombinant Microbes for Industrial and Agricultural Applications" Marcel Dkker,Inc.New York,U.S.A., 904 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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