| 研究課題/領域番号 |
05454113
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用動物科学
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
小野寺 良次 宮崎大学, 農学部, 教授 (60040862)
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| 研究分担者 |
富田 純史 宮崎大学, 農学部, 助教授 (70113230)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
7,500千円 (直接経費: 7,500千円)
1995年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1994年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1993年度: 5,600千円 (直接経費: 5,600千円)
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| キーワード | ルーメン / プロトゾア / Entodinium caudatum / mRNA / cDNA / ジアミノピメリン酸脱炭酸酵素 / コドンの使い方 / 終止コドン / ルーメンプロトゾア / cDNAライブラリー / リジン合成酵素 / lysAジーン塩基配列 / コドンユ-セジ / ユニバーサルコドン / E.caudatum 山羊 / RNA / lysAジーン / Entodirium caudatum / CysAジーン塩基配列 |
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| 研究概要 |
ルーメンプロトゾアの遺伝子解析は未踏で、予期せぬ諸問題発生のため、研究計画は大幅に遅れたが、結果は、確実に遺伝子解析まで到達し、Entodinium caudatumのリジン合成酵素遺伝子(lysA)の塩基配列を部分的ながら世界で初めて決めた。この成果は、今後の同プロトゾアの遺伝子解析の基礎となるもので、きわめて意義深いと考える。まず、初年度の最初に問題になった点はmRNA作成時のプロトゾアの由来である。アノトバイオート培養由来のものはmRNA量が少な過ぎて、cDNAの作成には使えなかった。完全無虫山羊のルーメンに同プロトゾアのみを接種したモノフォーネート山羊からのものはmRNA量が多量であった。cDNAライブラリー作成後は、まず、リジン要求E.coli変異株によりスクリーニングを行った。その結果、一度は、計画通りに進み、スクリーニングができたかに思えたが、途中で変異株が明確な反応を示さなくなり、時間的なこともあり、再検討すべき懸案とした。また、一般的なプロトゾア(繊毛虫)は、終止コドンの使い方が他の生物と異なることもあり、ルーメンプロトゾア(繊毛虫)がその例外とは必ずしも言えないので、当初計画のホモロガスプローブ法でも試した。すなわち、E.coli,Corynebacterium glutamicumなどの細菌間でホモロジーの高いlysAジーンの塩基配列部分を合成し、これをディゴキシゲニンでラベルしてプローブとした。その配列は、5'TTAAATCTTGGAGGCGGATTC3'である。これによりcDNAライブラリーからポジティブプラークを検出できた。このクローンをプラスミドに変換し、チェーンターミネーター法により塩基配列を決定中である。これまでに、ルーメン繊毛虫は、他と違い(Euplotesと同様)、終止コドンとしてTAAを使っていることが分かった。また、Euplotesでは、TGAがシステインを認識するが、E.caudatumでは、ユニバーサルなTGCがシステインを認識していると考えられた。
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