| 研究課題/領域番号 |
05454121
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用獣医学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
金川 弘司 北海道大学, 大学院獣医学研究科, 教授 (00111162)
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| 研究分担者 |
菱沼 貢 北海道大学, 大学院獣医学研究科, 助手 (30183578)
高橋 芳幸 北海道大学, 大学院獣医学研究科, 助教授 (70167485)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
1995年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1994年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1993年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
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| キーワード | マウス / ウシ / 核移植 / 切断2分離 / 胚 / 発生 / 胚発生 / 細胞周期 / 移植胚の初期化 / 核と細胞質の電気融合 / 前核置換 / 除核 |
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| 研究概要 |
本研究では、まず実験小動物であるマウスを用いて胚の切断2分離と割球の単離によりクローン胚を作出し、胚の発生能力を調べた。次にマウス卵子および胚を用いて核移植実験を行い、核移植の基礎技術を確立し、核移植胚の発生能力について検討した。同時にウシ卵子の体外成熟、体外受精および体外培養技術の改良を進め、得られたウシ卵子および胚を用いて核移植実験を実施し、核移植胚の体外および体内での発生能力など基礎的な検討を行った。その結果、以下のことが明らかとなった。1. マウス切断2分離胚の発生:マウス2分離胚の体内における消失、発育の遅延および大きさの減少とその後の胚発育の修復過程が明らかとなった。2. マウス4細胞期胚の単一割球の発生:2、4および8細胞期単為発生卵と4細胞期胚の割球の集合により毛色キメラ産子が得られた。3. マウス核移植胚における発生の初期化:成熟未受精卵細胞質はマウス2〜8細胞期胚由来の核を初期化する能力を持っていることが判明した。また、核と細胞質との相互作用が核移植胚の初期化に非常に重要な要因であり、核移植胚の完全な初期化のためには、細胞周期の初期ステージにある胚の核を除核成熟未受精卵の細胞質に移植することが重要であることが明らかとなった。4. ウシの体外受精卵子と体外受精卵を用いた核移植:初期胚の発育に影響すると思われる各種の要因を検討することにより、化学的組成の明らかな限定培地を用いたウシ体外受精卵の培養が可能となり、胚盤胞を多数作出できた。体外成熟卵子と体外受精卵を用いたウシ核移植技術について検討した結果、ドナー胚にノコダゾール処理を行い、エタノールとシクロヘキシミドの複合活性化処理を加えた若齢卵子をレシピエントとして用いた場合、胚盤胞期への発育率が改善されることが明らかとなった。ウシ核移植胚をレシピエント牛に移植した結果、産子が得られた。
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