| 研究課題/領域番号 |
05454159
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
中村 俊一 神戸大学, 医学部, 助教授 (40155833)
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| 研究分担者 |
荻田 浩司 神戸大学, 医学部, 助手 (60204103)
浅岡 良則 神戸大学, バイオシグナル研究センター, 助教授 (20222565)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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| 配分額 *注記 |
6,800千円 (直接経費: 6,800千円)
1994年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1993年度: 4,800千円 (直接経費: 4,800千円)
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| キーワード | プロテイン・キナーゼC / ホスホリパーゼD / ジアシルグリセロール / G蛋白質 / コリン燐脂質 / ホルボルエステル / tyrosine kinase |
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| 研究概要 |
数多くの外界シグナルが、コリン燐脂質の代謝回転を亢進することが種々の細胞系で証明されつつある。コリン燐脂質代謝により産生されるジアシルグリセロールによるプロテイン・キナーゼCの長期活性化が、細胞分化、増殖、癌化を始めとする細胞の長期効果に重要であると考えられているが、このジアシルグリセロールの分子レベルでの産生調説機構には現在尚不明な点が多い。初年度は、受容体刺激に連動するコリン燐脂質加水分解とPKC活性化の共役機構の解析を、コリン燐脂質加水分解反応の主要酵素であるホスホリパーゼD(PLD)に焦点を絞り、細胞レベルで解析を行った。ヒト白血病由来HL-60細胞に於いて、プロテイン・キナーゼCの活性化剤であるTPAをもちいてPLDの活性を測定したところ、TPA濃度依存性にPLDの顕著な活性化を認めた。更に分子レベルでこの活性化機構を解明する目的で、細菌毒素ストレプトリジンOを用いて細胞膜透過性細胞を作成し、解析した結果、上記のTPAの効果には、GTP-γ-Sが必須であり、PLDの活性調節には、G蛋白質とプロテイン・キナーゼCによる蛋白質燐酸化反応が密接に関与していることが明らかとなった。
最終年度は、更に分子レベルでのPLDの活性調節機構に着目し、解析を行った結果、以下の研究成果を得た。PLDを動物組織より抽出し、その活性を測定したところ、脾臓、腎臓に最も高い酵素活性が見い出され、用いる酵素活性測定条件により、今までの報告とは全く異なった分布結果が得られることを明らかにした。PLDは細胞膜結合型蛋白質であり、その酵素活性発現には、細胞質の可溶性画分に存在するG蛋白質、更に複数の蛋白質が関与することを示す実験的根拠を得た。現在これらの蛋白質を分離精製し、コリン燐脂質代謝回転とプロテイン・キナーゼC活性化の共役機構を分子レベルで解析している。
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