| 研究概要 |
血管内リンパ腫Intravascular malignant lymphomatosis(IML),いわゆるﾞNAE″,は中枢神経系を含む全身諸臓器の小動脈や毛細血管内に腫瘍細胞が増殖する特異な疾患である.この腫瘍細胞の由来に関して長年議論が続けられてきたが,我々は免疫組織学的検索・免疫受容体遺伝子再構成の検索により,この腫瘍細胞がリンパ球系細胞由来であることを確定してきた.本研究ではIML腫瘍細胞における遺伝子変化を明確にし,その発生母細胞の起源を追跡することを目的とした.
1.免疫受容体遺伝子の検索:IMLにおける免疫グロブリン遺伝子再構成の実体を明らかにする目的で,免疫グロブリンH鎖のV-D-J接合部領域であるComplementarity-determining region(CDR-III)を解析した.V領域Fr3配列とJ領域配列とをprimerとしてPCR法で増殖し,ポリアクリルアミドゲル電気泳動を行なった.IMLおよびB細胞性悪性リンパ腫でのみモノクロナルなPCR産物が認められたが,癌,Glioma,正常末梢血などではそうした産物は増幅されないことから,リンパ腫細胞に固有のものと考えられた.このPRC産物をcloningしIML腫瘍細胞に固有なCDR-III領域の塩基配列を決定した.その配列はRT-PCR法により得られた同一症例のcDNAの塩基配列と一致した.IMLは生前確定診断が極めて困難な疾患であるが,PCR法を用いた免疫グロブリン遺伝子の検出によって早期確定診断の可能性があると考えられた(発表予定).
2.がん抑制遺伝子の検索:IMLではがん抑制遺伝子に関する報告は皆無である.我々は上記3例のIML腫瘍組織DNAを対象にがん抑制遺伝子p53,p16(MTS1),P21(WAF1)を検索した.p53遺伝子Exon5,6,7,8およびp16遺伝子Exon2についてPCR-SSCPを行なったが,3例ともに異常バンドは検出されなかった.p21遺伝子Exon2でバンドの移動度に変化を認め,PCR産物をcloningし塩基解析を行なった結果3例ともにp21遺伝子のcodon31にアミノ酸変化を伴う塩基置換を認めた.現時点ではこのアミノ酸置換の意義は不明であるが,正常人末梢血DNAを検索したところ約30%程度に見られることから一種のpolymorphismと考えられた(発表予定).
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