| 研究課題/領域番号 |
05454670
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
神経化学・神経薬理学
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| 研究機関 | 大阪大学 (1994-1995)
(財)東京都神経科学総合研究所 (1993) |
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研究代表者 |
吉川 和明 大阪大学, たんぱく質研修所, 教授 (30094452)
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| 研究分担者 |
植月 太一 大阪大学, たんぱく質研究所, 助手 (20260309)
谷浦 秀夫 大阪大学, たんぱく質研究所, 助手 (80263325)
高城 啓一 (財)東京都神経科学総合研究所, 分子神経生物学研究部門, 主事研究員 (30250202)
杉浦 弘子 (財)東京都神経科学総合研究所, 分子神経生物学研究部門, 主事研究員 (40162870)
矢尾板 芳郎 (財)東京都神経科学総合研究所, 分子神経生物学研究部門, 副参事研究員 (00166472)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
7,200千円 (直接経費: 7,200千円)
1995年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1994年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1993年度: 5,600千円 (直接経費: 5,600千円)
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| キーワード | 遺伝子導入 / ニューロン / 発生分化 / necdin / 細胞分裂 / 遺伝子発現 / プロモーター / 転写因子 / 神経分化 / 分裂終了 / 特異的cis配列 / 転写制御因子 / trans因子 / P19細胞 / 核 / 個体発生 / 系統発生 / 遺伝子 |
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| 研究概要 |
遺伝子導入法を用いて,ニューロンの発生分化を司る分子機構を明らかにするため,分化ニューロンの重要な形質として細胞分裂終止に着目して研究を行った.necdin cDNAを発現誘導性ベクターに挿入し、NIH3T3細胞に安定的に遺伝子を導入した。遺伝子導入細胞を誘導物質で発現を活性化したところ、細胞内発現したnecdinは細胞核に集積し、細胞分裂を停止させることが判った。次に,神経分化特異的核蛋白質necdinの遺伝子プロモーター調節領域に存在することが予想される神経分化特異的配列を解析した。クローン化したnecdin遺伝子の5'上流領域の欠失変異を作製し、それにレポーター遺伝子を連結して、神経分化特異的配列を明らかにした。その結果、necdin遺伝子の5'上流領域には典型的なTATAボックスやCAA配列は認められなかった。しかし、ショウジョウバエの神経発生に重要な転写因子であるsingle-minded(SIM)遺伝子と結合する可能性のあるxenobiotic respon-sive elementを含むpostmotic neuron specific elementが存在することを明らかにした。次に、そのプロモーターがin vivo状態で活性を示すか否かをプロモーター調節領域にレポーター遺伝子を連結したベクターをゼブラフィシュの受精卵に微量注入して、神経分化させたところ、分化したニューロンに特異的に発現することが判った。これらの遺伝子導入法を用いた研究によって,necdin遺伝子は分化した神経細胞に特異的に発現する遺伝子発現調節領域をもっていることが明らかになった.したがって,necdinは分化ニューロンに特異的に発現して,ニューロンの最も基本的な性質ともいえる分裂終了機構に関与しているものと推定される。
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