| 研究課題/領域番号 |
05640737
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
植物生理
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| 研究機関 | 東邦大学 |
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研究代表者 |
岡田 光正 東邦大学, 理学部・生物分子科学科, 教授 (80057629)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1994年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1993年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | アデニレートシクラーゼ / ダナリエラ / 耐塩性 |
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| 研究概要 |
1)ダナリエラの光合成の特性の測定
ダナリエラの浸透圧や強光に対する反応にはアデニレートクラーゼによる細胞内情報伝達系が関連していると考えられている。環境の変化に対応したこの藻の増殖、色素組成、色素タンパク質の特性を調べた。
・10%NaClを含む培地では約10日で7x10の5乗まで増殖しその後死滅期に入るが、25%NaClの培地では30日までゆっくりと増加し、4x10の4乗で定常となった。
・培養日数の増加に伴い、beta-caroteneの蓄積が顕緒になった。
・光化学系IIの集光性クロロフィルタンパク質は弱光で培養したとき、そのクロロフィルa/b比は1.8であるのに対し、強光下では3.5と変化し、カロチノイド、クロロフィルa、b間のエネルギー移動の効率も変化した。
2)ダナリエラのアデニレートシクラーゼの特性
・シクラーゼの比活性は、培養開始後約20日で最大(0.42pmol/ug protein)となった。
・シクラーゼ活性はMgイオンに依存し、5mMでほぼ最大の活性となった。
・また、Caイオンにより強い阻害を受け、50%阻害濃度は、50-100uMで500uM存在下でほぼ完全に阻害された。
3)ダナリエラのアデニレートシクラーゼの精製
凍結した藻体を15%グリセロールを含む緩衝液中でDNase処理し、テフロンホモジナイザーでホモジナイズした後、超遠心により膜画分を得た。これを1MのNaClで処理して可溶化されたタンパク質を酵素粗抽出液とした。この液をポリエチレングリコールで脱水濃縮し、Pharmacia FPLC System(Superrose12カラム)でゲル濾過をおこない、流出画分の活性をラジオイムノアッセイにより測定した。活性は、分子量452kDaの単一のピークを示した。SDS-PAGEでは、ACのものと思われる116kDaのバンドを得た。
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