| 研究課題/領域番号 |
05660144
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
食品科学・製品科学
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
白畑 實隆 九州大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (90154377)
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| 研究分担者 |
立花 宏文 九州大学, 大学院・農学研究科, 講師 (70236545)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1994年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1993年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
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| キーワード | 動物細胞生産性増強 / プロモーター活性化 / ガン遺伝子 / rasガン遺伝子 / CMVプロモーター / 組換えタンパク質 / 遺伝子増幅 / ElAガン遺伝子 / ras / ElA / ヒトインターロイキン-6 |
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| 研究概要 |
動物細胞の組換えタンパク質生産性を増強するために、ガン遺伝子産物による特定のプロモーター活性化作用を利用して細胞の組換えタンパク質の生産性を増強する系、Oncogene-Activated Production(OAP)システムを開発し、組換えタンパク質高発現細胞株の育種を試みた。まずOAPシステムの有効性を一過性発現実験で検討したところ、明らかにガン遺伝子産物による生産性増強効果が確認された。つぎにBHK-21細胞株に各種ガン遺伝子をdhfr遺伝子とともに導入し一段階の遺伝子増幅を行ったところ、c-Ha-rasガン遺伝子を導入したとき、ヒトサイトメガロウイルス前初期プロモーター制御下でのヒトインターロイキン-6(hIL-6)の生産性が約35倍まで増強され、この効果はElAガン遺伝子を導入することによりさらに約10倍増強された。他のc-fos、v-jun、v-myb、そしてc-mycガン遺伝子にはc-Ha-rasガン遺伝子との相乗効果は見られなかった。rasガン遺伝子をBHK-21細胞に導入し遺伝子増幅を行うことにより高生産性細胞株を迅速に樹立できる宿主細胞を取得できた。c-Ha-rasとElAガン遺伝子の生産性増強効果について検討した結果、c-Ha-rasはプロテイン・キナーゼCを介してNF-кBの転写活性化を促進しており、ElAはc-Ha-rasに依存した転写活性化作用に関していると推定された。また、他のヒト型組換えタンパク質、たとえばエリスロポエチン、顆粒球コロニー刺激因子、モノクローナル抗体などの発現においてもc-Ha-rasによる生産性増強効果が確認された。
以上のように、OAPシステムを用いることにより組換えタンパク質高発現動物細胞株の育種を迅速かつ簡便に行えることが明らかとなった。
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