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インフルエンザウイルスの潜伏感染細胞におけるウイルスゲノムの動向に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 05670283
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 ウイルス学
研究機関自治医科大学

研究代表者

田中 利典  自治医科大学, 医学部, 講師 (30146154)

研究分担者 TANAKA Toshinori  Jichi Med.Sch.Dept.of Virology Ass.Prof. (30146154)
研究期間 (年度) 1993 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1994年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1993年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
キーワードインフルエンザウイルス / MDBK細胞 / NS遺伝子 / M遺伝子 / NP遺伝子 / 潜伏感染 / RT-PCR法 / NS遺伝子(ゲノム) / competivePCR法
研究概要

研究の目的は、インフルエンザウイルスが潜伏感染していると考えられるMDCK細胞のvariant(MDCK-L)細胞内のウイルスに特異的なゲノムを正確に定量し、細胞継代に伴うこれらのゲノムの動向を明らかにすると共に、潜伏感染細胞でのインフルエンザウイルスの機能発現様式を検討することである。インフルエンザウイルスの8種類のゲノムのうち、NS、M、及び、NPをベクター(Bluescript)にクローニングし、各々に制限酵素で切断できる部位を構築した。各々のベクターからインターナルコントロール(IC)としてのマイナス鎖のRNAを合成した。各々のゲノムについて既知量のICをMDBK-R細胞の破砕時に投与し、常法で総核酸を抽出した後、ICとウイルスゲノムを含む総核酸をRT-PCRに供した。制限酵素で処理したPCR産物をアガロース電気泳動で分離すると、切断されたICとウイルスゲノムのPCR産物を区別して定量することができた。両者の量比を求めることにより、既知量のICから細胞に存在するウイルスゲノムRNAを定量することができた。この方法により、以下のことが明らかになった。(1)8代継代したMDCK-L細胞内に8種類すべてのウイルスに特異的なゲノムを検出した。(2)M,NSについては、cRNAもmRNAも検出された。(3)8代継代したMDCK-L細胞内には、各々0.5〜0.8コピーのゲノムが存在しており、18代継代した同細胞内には0.1〜0.3コピーのゲノムが存在していた。ゲノムは細胞の継代にともなって徐々に減少しているが、継代数を考慮すると、ほとんど減少していないと考えられる。また、10代にわたる継代に伴ってRNAが分解されないことは考えにくいので、この細胞ではウイルスのゲノムが増殖しながら持続していることが示唆される。(4)25代継代細胞におけるNS遺伝子(PCR産物)の中から5つをクローニングして配列を決定したところ、いずれも6〜11ヶ所において変異が認められた。これらがPCRに伴う人為的変異か否かは検討中であるが、何れのクローンもA/WSNのRNA配列と異なることから、インフルエンザのゲノムはヘテロで存在している可能性を示唆していると考えられる。

報告書

(3件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 研究成果

    (7件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (7件)

  • [文献書誌] M.Urabe,T.Tanaka and K.Tobita: "MDBK cells which survived infection with a mutant of influenza virus A/WSN and subsequently received many passages contained viral M and NS genes in full length in the absence of virus production" Arch Virol. 130. 457-462 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Urabe,T.Tanaka and K.Tobita: "Persistence of viral genes in a variant MDBK cells after productive replication of a mutant of influenza A/WSN" Arch Virol,. 128. 97-110 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Urabe,T.Tanaka and K.Tobita: "Use of competitive PCR to estimate the level of NS gene persisting in MDCK cells which survived productive replication of a mutant of influenza virus A/WSN" Journal of Virological Methods,. 49. 361-366 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Urabe, T.Tanaka and K.Tobita: "MDBK cells which survived infection with a mutant of influenza virus A/WSN and subsequently received many passages contained viral M and NS genes in full length in the absence of virus production" Arch Virol. 130. 457-462 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Urabe, T.Tanaka and K.Tobita: "Persistence of viral genes in a variant MDBK cells after productive replication of a mutant of influenza A/WSN" Arch Virol. 128. 97-110 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Urabe, T.Tanaka and K.Tobita: "Use of competitive PCR to estimate the level of NS gene persisting in MDCK cells which survived productive replication of a mutant of influenza virus A/WSN" J.of Virol.Meth.49. 361-366 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Urabe,T.Tanaka and K.Tobita: "MDBK cells which survived infection with a mutant of lnfluenza virus A/WSN and subeezueitly received many passages contained viral M and NS genes in full length in the absence of vims protection." Archines of Virology. 130. 457-462 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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