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BUdR,IUdR in vitro二重標識法による腫瘍細胞動態解析法の確立

研究課題

研究課題/領域番号 05670757
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 放射線科学
研究機関弘前大学

研究代表者

真里谷 靖  弘前大学, 医学部附属病院, 講師 (20239148)

研究分担者 中野 京子  弘前大学, 医療技術短期大学部, 助手 (10113820)
佐藤 達資  弘前大学, 医療技術短期大学部, 教授 (00091611)
樽沢 信子  弘前大学, 医学部, 助手 (80154079)
竹川 鉦一  弘前大学, 医学部, 教授 (80171627)
研究期間 (年度) 1993
研究課題ステータス 完了 (1993年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1993年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
キーワードtumor cell kinetics / bromodeoxyuridire / iododeoxyuridine / potential doubling time / in vitro labeling
研究概要

(1)HeLa細胞など数種類の培養細胞を用いて、iododeoxyuridine(IUdR)とbromodeoxyuridine(BUdR)の二重標識とモノクローナル抗体を用いた免疫組識染色(ABC法、APAAP^-法)による細胞動態解析法の基礎的検討を行った。この結果、一次抗体(BR3、IU4)の希釈率は250倍が適当であり、ABC法、APAAP法の発色基質はDABとFast Blue塩の組み合わせが良好であった。また、上記により得られた各培養細胞のpotential doubling timeは、log phaseでの倍加時間に近似していた。
(2)ラット骨肉腫(POB)を用いて、in vivo標識(腹腔内投与)およびin vitro標識による結果の異同について検討した。in vivo標識では、ABC法、APAAP法の併用で解析できたが、in vitro標識では染色状態が不良のため、ABC法のみにより二枚の連続標本を用いて解析した。この結果、in vivo標識によるpotential doubling time とin vitro標識によるそれには、大きな差異はなかった。しかし、in vitro標識での染色状態(BUdR-BR3)は不安定であり、溶液中のBUdRあるいは染色過程での抗体(BR3)の濃度を変化させても明らかな改善は得られなかった。
(3)免疫組識染色は、かなりtime consumingであることから、臨床応用を考える上でより実際的かつ迅速なflow cytometryによる解析の可能性についても平行して検討した。微量の臨床検体を用いることから、細胞のlossの少ない未固定法の導入、および混入する正常細胞(リンパ球、線維芽細胞など)除去のための抗サイトケラチン抗体の利用を試みた。この結果、培養細胞においては、界面活性剤添加ののち一次、二次抗体を添加していく未固定法の手技をほぼ確立した。また、phycoerythrin標識抗サイトケラチン抗体を作製することで、正常細胞を解析データから大部分除去することが可能となった。

報告書

(1件)
  • 1993 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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