| 研究課題/領域番号 |
05671817
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
川嵜 伸子 京都大学, 医療技術短期大学部, 助教授 (70077676)
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| 研究分担者 |
川嵜 敏祐 京都大学, 薬学部, 教授 (50025706)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1994年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1993年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
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| キーワード | コングルチニン / レクチン / ウシ血清 / cDNA / 遺伝子構造 / エキソン-イントロン構造 / コラーゲン様構造 / N-アセチルグルコサミン / 動物レクチン |
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| 研究概要 |
ウシ血清中に存在し、N-アセチルグルコサミンに特異的なCa^<2+>依存性のレクチンであるコングルチニンの生物学的意義および分子内にコラーゲン様構造をもつ他の血清レクチン(コレクチンと呼ばれる)との関連を遺伝子レベルで解明するためにコングルチニン遺伝子の構造を解析した。
1)コングルチニン全長cDNAのヌクレオチド配列の決定。
タンパク質化学的に決定したコングルチニンの部分アミノ酸配列に基づいて設計した縮重オリゴヌクレオチドプライマーを用い、ウシ肝ポリ(A)^+を鋳型とし、RT-PCE法により中央部cDNA断片を増幅し、塩基配列を決定した。次にこの中央部cDNAの塩基配列に基づいて設計した特異的プライマーとオリゴ(dT)プライマーを用いRACE法により3′-末端領域、5′-末端領域のcDNA断片を増幅しそれぞれの断片の塩基配列を決定した。以上の、中央部、3′-末端、5′-末端領域cDNAの塩基配列を合わせることにより、全長cDNA(1548bp)のコーディング領域と非コーディング領域の全塩基配列を決定した。
2)コングルチニンゲノム遺伝子のエキソン-イントロン構造の解明。
1)で決定したcDNAの塩基配列に基づき、特異的なプライマーを設計し、ウシ肝ゲノムDNAを鋳型としてPCR法により、各プライマー間のコングルチニン遺伝子断片を増幅し、塩基配列を解析した。コングルチニン遺伝子は全長7.5kb以上であり、mRNAの翻訳領域は7個のエキソンから成っていた。コングルチニンに特徴的な長いコラーゲン領域は5個のエキソンによって、またネック領域および糖認識ドメイン(CRD)はそれぞれ別の1個のエキソンによってコードされていた。この遺伝子構造は他のコレクチン(肺表面活性アポタンパク質Dおよびマンナン結合タンパク質など)のものと類似しており、これらのレクチンが共通祖先遺伝子に由来し、その生物学的意義もよく似ていることが示唆された。
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