| 研究課題/領域番号 |
05671835
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 静岡県立大学 |
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研究代表者 |
竹石 桂一 静岡県立大学, 食品栄養科学部, 教授 (90012608)
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| 研究分担者 |
堀江 信之 静岡県立大学, 食品栄養科学部, 助手 (70209287)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1994年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1993年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | チミジル酸合成酵素 / CATアッセイ / DNAエレメント / DNA結合蛋白質 / RNA結合蛋白質 / DNA多型性 / 細胞分化 / 核内因子 / 転写制御 / 転写後制御 / ヒト遺伝子 / プロモーター / サイレンサー |
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| 研究概要 |
ヒトチミジル酸合成酵素(TS)遺伝子の発現調節領域は、TS遺伝子の細胞内における高度の発現調節の必要性から特異な特徴をもつことが予想される。実際、プロモーターの既知共通配列が見当らないことや、ユニークな構造をした逆向き繰り返し配列が翻訳開始コドンのすぐ上流に存在することなど、その構造に特異な点が認められている。
本研究においては、ヒトTS遺伝子の転写開始点近傍の領域について、多くの欠失や塩基置換の突然変異体を作製して、プロモーター及び発現調節エレメントを詳細に解析した。その結果、プロモーターとして典型的なGC boxとは異なるSp1結合部位の他、CA box(CCACACCC)、負の制御エレメント及びオクタマ-配列が転写開始点の上流域に同定された。転写開始点の下流域については、上述の逆向き繰り返し配列の領域もヒトTS遺伝子の発現に不可欠であることが明らかになった。また、この繰り返し単位の数に関する多型性の存在が判明し、それによって遺伝子の発現活性が影響されることも示唆された。さらに、繰り返し配列の領域に対応したRNAに結合する蛋白質性因子が核及び細胞質由来の抽出液に存在することが見出され、この配列が転写後の段階で遺伝子の発現調節に関与している可能性が示唆された。一方、ヒト白血病HL-60細胞をレチノイン酸処理によって顆粒球に分化させた時、マクロファージ様細胞に分化させた場合の従来の知見と同様、遺伝子の翻訳開始コドンの近傍に結合する核内因子NF-TS3が分化に伴って変動することが示された。
本研究の結果及びこれまでの知見から、ヒトTS遺伝子においてプロモーター及び多くのシスエレメントが同定され、またトランスに作用する複数の蛋白質因子も確認された。今後さらに新たな因子を同定すると共に、それら因子の役割、特に細胞環境の変化に伴う正と負に作用する発現調節蛋白質因子の変動を解明していく予定である。
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