| 研究概要 |
PLA_2基質アナログであるカルボン酸アミド型,オキサゾリジノン型,およびスルホン酸アミド型基質アナログとI型およびII型に属する種々のPLA_2との結合におよぼすCa^<2+>とpHの影響を調べた結果,オキサゾリジノン型基質アナログでは真の基質と同様の結果が得られた.しかし,カルボン酸アミド型とスルホン酸アミド型基質アナログでは真の基質と異なる結果が得られた.これは,カルボン酸アミド型やスルホン酸アミド型基質アナログでは,アナログ分子中のアミド基がPLA_2の触媒基であるHis48と水素結合を形成するが,真の基質やオキサゾリジノン型基質アナログにはアミド基が存在しないため触媒基His48との水素結合が形成されないことによる結果と考えられた。以上の結果から,カルボン酸アミド型やスルホン酸アミド型基質アナログの場合とは異なり,オキサゾリジノン型基質アナログとPLA_2の結合様式は真の基質の場合とよく似ていることが示唆された.
また,マノアライドアナログは,Lys残基を修飾することでPLA_2を不活性化する.PLA_2分子内には,触媒部位と界面認識部位の2つの酵素活性に重要な部位が存在する.そこで,マノアライドアナログによるPLA_2の不活性化に関与する部位について調べた結果,ウシ膵臓PLA_2は界面認識部位に存在する56位のLys残基の修飾が関与し,ウミヘビ毒,ハブ毒,クサリヘビ毒PLA_2では触媒部位の69位のLys残基に加え,上記の2つ以外の部位が不活性化に影響することがわかった.一方,マムシ毒PLA_2の不活性化には上記の2つの部位は関与しないことが明らかとなった.このように,マノアライドアナログによるPLA_2の不活性化には触媒部位と界面認識部位以外のLys残基の修飾も関与することが考えられた.これは,触媒部位の裏側などに存在するLys残基がマノアライドアナログによって修飾され,PLA_2の立体構造を変化させた効果によることが推測される.
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