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相同組換えを利用したマウス受精卵への巨大遺伝子導入に関する基礎的研究

研究課題

研究課題/領域番号 05680741
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 実験動物学
研究機関慶応義塾大学

研究代表者

下田 耕治  慶應義塾大学, 医学部, 助手 (00129470)

研究分担者 前島 一淑  慶應義塾大学, 医学部, 教授 (70051464)
研究期間 (年度) 1993 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1994年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1993年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
キーワードトランスジェニックマウス / 相同組換え / 導入方法
研究概要

外来遺伝子を直接受精卵前核にマイクロインジェクションして作製されるトランスジェニックマウスは、実験動物学の分野のみならず広く医学生物学の分野で欠くことのできない研究手段となっている。しかしながら、注入された外来遺伝子断片がどのようにマウス染色体上に組み込なれるかに関する知見は少ない。そこで我々は挿入された外来DNAの組み込み状況について検討した。まず、互いにオーバーラップしない通常の遺伝子断片として、カルモジュリン遺伝子II型のプロモーター領域294bpにレポーター遺伝子としてlacZを繋ぎ、さらにその下流にSV40のスプライシング領域およびpolyAサイトを結合したミニジーンpW294galを構築した。オーバーラップを有する遺伝子断片として、ヒトパピローマウイルス16型DNA全配列の1.4倍の長さを持つDNA断片HPV16x1,4を構築した。これらをマイクロインジェクションし、得られたトランスジェニックマウスの遺伝子組み込み状況を検索した。導入遺伝子同志の結合部位を囲む領域の塩基配列を決定した結果、Pw294galでは数塩基の欠失や置換が観察され、HPV16x1.4ではオーバーラップ部位での相同組換えと数塩基の置換が見られたが、遺伝子の発現に影響する程の大きな欠落等は検出されなかった。以上の成績から、複数のオーバーラップを有するDNA断片をマイクロインジェクションすることにより、相同組換えを起し挿入された外来遺伝子は、長大ない遺伝子に構成される可能性が強く示唆された。

報告書

(3件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 研究成果

    (9件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (9件)

  • [文献書誌] Matsuo,K et al.: "Expression of the rat calmodnlin geneII in the central nervous sxsten" Moleaular Brain Research. 20. 9-20 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeshima,H.et al.: "Spliratocyte splcidic transcription by calmodulin gene II pronoter in transgenic rnicl" Moleaular Cellular Endoorinalogg. 90. 49-53 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Simada,K.et al: "Spatial and tlnpiral regalatin of tib rat calmodulin gene II girected by a 877-base pronatin ornd." Moleaular Brain Research. (in press). (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matuo, K., Ikeshima, H., Shimoda, K., Umezawa, J., Hata, J., Maejima, K., Nojima, H.and Takano, T.: "Expression of the rat calmodulin gene II in the central nervous system : a 294-base promoter and 68-base leader segment mediates neuron-specific gene expression in transgenic mice." Mol.Brain Res.20. 9-20 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ikeshima, H., Shimoda, K., Matuo, K., Hata, J., Maejima, K.and Takano, K.: "Spermatocyte-specific transcription by calmodulin gene II promoter in transgenic mice." Mol.Cell.Endocrinol.99. 49-53 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shimoda, K., Ikeshima, H., Matuo, K., Hata, J., Maejima, K.and Takano, T.: "Spatial and temporal regulation of the rat calmodulin gene III directed by a 877-base promoter and 103-base leader segment in the mature and embryonal central nervous system of transgenic mice." Mol.Brain Res.(in press.). (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuo,K. et al.: "Expression of the rat calrodilinglnl II in the central nervous system." Mollecular Brain Research. 20. 9-20 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Ikeshima,H. et al.: "Spunatocyte-splcific transcriptim by calmodulin gene II pronotlr in transgenic mill" 90. 49-53 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Shimoda,K. et al: "Spatial and Temporal regulater of the rat calmodulin gene III directed by a 877-bacl and 103 leader glcaence..." Mollecular Brain Research. (in press). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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