| 研究課題/領域番号 |
05772008
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 理化学研究所 |
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研究代表者 |
浴 俊彦 理化学研究所, ジーンバンク, 研究員 (40192512)
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| 研究期間 (年度) |
1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1993年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | DNAプライマーゼ / cDNA / 複製関連酵素 / 染色体マッピング |
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| 研究概要 |
DNAプライマーゼは、原核細胞から真核細胞にいたるまでDNA複合開始に必須な酵素である。本研究においては、ヒトDNAプライマーゼを構成する46kDa、54kDaサブユニットをコードするcDNAクローンの一次構造の解析、ゲノミック遺伝子の解析を通じて、DNAプライマーゼに関する分子生物学的知見を得ることを目的とした。その結果、以下のことが明らかにされた。
1 ヒトDNAプライマーゼを構成する46kDa、54kDaサブユニットをコードするcDNAクローンをlambdagt10ライブラリーより単離し、全一次構造を決定した。46kDaサブユニットについては420アミノ酸残基の、また54kDaサブユニットについては505アミノ酸残基から成るopen reading frameを得た。
2 一次構造について酵母、マウス、ヒトで比較した結果、両サブユニットについて5カ所づつの保存されたドメイン(金属結合モチーフ等を含む)が見いだされた。また糖鎖付加部位については46kDa、54kDaサブユニットにつき2カ所、1カ所の存在が示唆された。
3 ノーザン法により46kDaサブユニットについては2.7kbと1.4kbの、また54kDaサブユニットについては2.4kbの長さの転写産物が検出された。
4 ESTプライマーと雑種細胞DNAパネルとを用いたPCR解析、また各々の遺伝子を含むコスミドクローンを用いた蛍光in situ hybridization法によって遺伝子の染色体マッピングを行った結果、46kDaサブユニット遺伝子については1番染色体テロメアに、54kDaサブユニット遺伝子については、3番と6番(短腕セントロメア近傍)染色体に座乗していることが明らかにされた。
5 発現ベクターを利用した両蛋白質の大量調製、また各遺伝子につき5'上流領域を含むエキソン・イントロン構造の解析を現在行っている。
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