| 研究概要 |
多細胞生物の神経ネットワーク形成は、未分化細胞が神経細胞へ分化することから始まる。ショウジョウバエにおいては、神経初期分化を司る遺伝子としてプロニューラル及びニューロジェニック遺伝子群が同定されている。一方、細胞に必須な機能(増殖、代謝、発生、分化)を支配する遺伝子は各生物間において高度に保存されている。そこで、プロニューラル遺伝子(da,AS-C,ato)のヒトホモログの単離を試みた。材料としては、レチノイン酸とBDNF添加により神経分化が誘導されるヒト神経芽腫細胞(SH-SY5Y)を用いた。誘導前、後の細胞より一方向性かつPCR増幅可能なcDNAライブラリを構築し、degenerate primer PCR法やハイブリダイゼーション法でスクリーニングを行った。得られたクローンの塩基配列を決定した結果、その中の一つ(hash1)がショウジョウバエAS-C遺伝子群やそのマウスホモログであるmash1と、特にbHLH領域において強い相同性を有していた。また、hash1が、SH-SY5Y細胞分化誘導時の極めて初期に発現し、かつ胎児脳及成人脳で特異的に発現していることをNorhtern解析により明らかにした。現在、この遺伝子の染色体領域をクローニングしたので、その発現制御領域の同定を行っている。さらに、hash1がショウジョウバエのAS-C遺伝子と同様の機能(神経決定能並びに細胞自律的機能)を有するか否か、SH-SY5Y細胞へのアンチセンスDNA導入やhash1強制発現により確認している。同時に、AS-Cと並列的または階層的に相互作用する遺伝子群(cut,poxn,numb,BarH1,sca,neu,hb)のヒトホモログの単離を進めている。
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