| 研究課題/領域番号 |
05807174
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
機能系基礎歯科学
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| 研究機関 | 東京歯科大学 |
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研究代表者 |
花岡 洋一 東京歯科大学, 歯学部法歯学講座, 講師 (30180912)
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| 研究期間 (年度) |
1993 – 1994
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| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
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| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1994年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1993年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
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| キーワード | 歯 / DNA分析 / DNAフィンガープリント / D4S43 locus / 性別判定 / ASF領域 / 歯牙 / PCR増幅 / DNA抽出 / 歯髄 / 歯牙の脱灰 |
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| 研究概要 |
1.歯からのDNA抽出:歯髄からは3-40mg程度のDNAが得られ抜歯後約1年経過した歯髄からでも高分子DNAが回収可能であった。また約1年の間では抽出DNA量と抜去歯の経過日数との間に相関は認められず、歯髄重量が5mg以上の場合に10μg以上のDNAが得られた。歯牙硬組織では0.5M EDTA溶液による1週間程度の脱灰でDNAの効率的な回収が行えたが、殆どの試料で低分子化したDNAのみが得られた。
2.歯牙抽出DNAによる多型分析:DNAフィンガープリント法は、歯髄のように高分子DNAが得られるものについては有効な方法であり血液抽出DNAと同様のパターンを示したが、1回の検索に3-5mgの高分子DNAを必要とするため歯牙硬組織試料には適しておらず、歯髄の場合でも繰り返しの検索が困難であるため、歯牙抽出DNAによる多型検索にはPCR法を用いることが適当であると考えられた。
3.D4S43 locusのVNTRの変異について:歯牙抽出DNAのPCR法を用いた多型検索を行う上で、PCR産物の比較的小さいD4S43 locusを対象とし、先ず血液より抽出したDNAを試料としてVNTRの変異について日本人の分布を調べたところ、184bpのバンドのallele頻度が最も高く約60%を示し、ヘテロ接合度は約59%であった。さらに繰り返し数1と思われる184%bpの位置のバンドにも由来の異なる4種の変異があることが判明した。
4.歯牙抽出DNAからの性別判定:ASF領域を対象としたWitt&Ericksonの方法に基づき歯牙抽出DNAより性別判定を試みたところ、増幅効率が良く制限酵素切断やDual PCR法の併用により正確な性別判定が可能であったが、歯牙硬組織男性試料の約14%に判定不能なものが存在した。
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