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熱ショック蛋白質(HSP)は、住血吸虫症において、患者や再感染防御能付与マウス(X線照射セルカリア感染マウス)の血清で認識される主要抗原として、重要な役割を演じている。本研究では、日本住血吸虫のリコンビナントHSPを合成し、ワクチンとしての有効性を確認することを最終目的として掲げ、今年度は以下の成績を得た。
1.日本住血吸虫のcDNAライブラリーを作製した。成虫poly(A)^+RNAよりcDNAを合成、lambdagt11(発現ベクター)に組み込んだ。
2.感染ウサギ血清を用いてライブラリーのスクリーニングを行った。
3.得られた陽性クローンから遺伝子断片を取り出し、プラスミド(pUC118)にサブクローニング、M13の系で、塩基配列を決定した。塩基配列及び推定アミノ酸配列に基づいてホモロジー検索を行ったところ、hsp90及びhsp60が複数含まれていることが分かった。それらの遺伝子構造は、大腸菌あるいはマウスのhspと高い相同性を示した。
4.hsp60の遺伝子断片のうち、抗原活性が高いと言われる3'末端側領域をコードするものを選択し、発現効率の高いプラスミドベクター(pMALc2)に挿入、大腸菌にトランスフェクトさせ、リコンビナントHSP60を得た。リコンビナントHSP60は、感染血清と強く反応することが分かった。
リコンビナントHSP60に対する抗血清をウサギで得た。イムノブロッティング法により検討したところ、日本住血吸虫の分子量約60kの蛋白質と強く反応することが分かった。
6.現在、患者血清を用いて、hsp70をスクリーニング中である。また、リコンビナントHSP90の発現効率の高い系を確立中である。
7.リコンビナントHSP60を精製した。マウスを用いてのワクチントライアルの系を検討中である。
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