研究課題/領域番号 |
05F05218
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研究種目 |
特別研究員奨励費
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配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 外国 |
研究分野 |
生理学一般
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研究機関 | 生理学研究所 |
研究代表者 |
岡田 泰伸 生理学研究所, 細胞器官研究系, 教授
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研究分担者 |
MANDADI Sravan 生理学研究所, 細胞器官研究系, 外国人特別研究員
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研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
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配分額 *注記 |
2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
2006年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2005年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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キーワード | TRPV3 / TRPV4 / バイオセンサー / ATP / ケラチノサイト / 感覚神経細胞 / パッチクランプ法 / カプサイシン受容体TRPV1 / リン酸化 / PKC / 抗リン酸化抗体 / 再感作 |
研究概要 |
カプサイシン受容体TRPV1は熱刺激を感知する温度感受性TRPチャネルであるが、同じ温度感受性TRPチャネルであるTRPV3,TRPV4は体温近傍の温かい温度によって活性化し、TRPV1とは異なり表皮ケラチノサイトに強く発現する。表皮ケラチノサイトが温度刺激を受容する場合、受容された温度情報は感覚神経に伝達されなければならない。拡散性分子がケラチノサイトから放出されて感覚神経を活性化させると想定して、マウスの表皮ケラチノサイトと感覚神経の共培養系を確立した。温度刺激を行って細胞内Ca^<2+>濃度変化を観察すると感覚神経細胞での細胞内Ca^<2+>濃度上昇はケラチノサイトの後に起こることがわかり、ATP阻害薬PPADSによってほぼ完全に抑制されたことから、温度刺激にともなってケラチノサイトからATPが放出されることが示唆された。そこで、マウスケラチノサイトとイオンチャネル型ATP受容体P2X2を強制発現させたHEK293細胞を共培養し、ホールセルパッチクランプしたHEK293細胞をケラチノサイトに近づけて、P2X2をバイオセンサーとして用いて温度刺激によってケラチノサイトから放出されるATPの検出を試みた。その結果、野生型マウス、TRPV1欠損マウス、TRPV4欠損マウスから得たケラチノサイトを用いた時に、温度刺激によってP2X2の電流が確認された。TRPV3欠損マウスのケラチノサイトを温度刺激しても非常に小さなATP活性化電流しか観察されず、表皮においては主にTRPV3が温度を感知してATPを放出しているものと考えられた。ケラチノサイトは刺激に応じてセロトニンやグルタミン酸を放出することが知られている。5-HT3やNMDA受容体を強制発現させたHEK293細胞ではケラチノサイトからの温度刺激依存的なセロトニンやグルタミン酸の放出は確認されなかった。より生理的なマウスケラチノサイトとマウス感覚神経細胞の共培養系において、パッチクランプした感覚神経細胞において温度刺激依存的にケラチノサイトから放出されるATPを感知し得た。
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