蛋白質チロシンキナーゼp72^<Syk>を介する細胞内情報伝達とG蛋白質

• 研究課題/領域番号: 06264211
• 研究種目: 重点領域研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 福井医科大学
• 研究代表者: 山村 博平 福井医科大学, 医学部, 教授 (90030882)
• 研究分担者: 柳 茂 福井医科大学, 医学部, 助手 (60252003) ; 稲津 哲也 福井医科大学, 医学部, 助手 (00242587)
• 研究期間 (年度): 1994
• 研究課題ステータス: 完了 (1994年度)
• 配分額: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円); 1994年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
• キーワード: Syk / チロシンキナーゼ / GTP結合蛋白質 / PI3-kinase / Shc

研究概要

本年度はまず新たにポリクローナル抗Syk抗体を作成し、Sykの細胞内情報伝達機構における位置付けを検討した。7回膜貫通型受容体はGTP結合蛋白質(G蛋白)とカップリングしていることが知られているが、これらの受容体を刺激するとSykは活性化することから、それらの活性化機構におけるG蛋白の関与が示唆された。多核白血球を用いた研究よりfMLP刺激によるSykの活性化には百日咳毒素感受性のG蛋白が介在しており、A kinase系の阻害剤によりSykの活性化が抑制されることを明らかにした。その一方で血小板ではG蛋白阻害剤存在下のcell freeの条件でもSykの活性化を検出したため、より複雑な機構により制御されているものと考えている。続いて低分子量G蛋白の1つであるRas活性化pathwayにおけるSykの関与を明らかにした。アゴニスト刺激によりSykはチロシンリン酸化されるが、血小板を用いた研究により、リン酸化チロシンと親和性のあるSH2を持つGTPase活性化蛋白質(GAP)がSykの基質となりうること、またphosphatidylinositol 3-kinase(PI3-kinase)とSykがassociationすることを見出した。特に後者はSyk免疫沈降物中に活性化型で存在し、その後Sykと共に細胞骨格系へ移行することを検出した。また黒崎らと我々のグループはSyk欠損株を含むB細胞の様々な変異株を作成し、B細胞抗原受容体からのシグナリングにおけるSykのRas pathwayへの関与を調べた。その結果、アダプター分子の一つであるShcはSykとassociateしており、刺激後に活性化されたSykによりチロシンリン酸化されることを見出した。さらにShcは別のアダプター分子であるGrb2と刺激依存性に結合することが確認され、Rasを介した核へのシグナル伝達経路にSykが一定の役割を持つことが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Takata,M.: "Tyrosine kinase Lyn and Syk regulate the B cell receptor-coupled Ca^<2+> mobilization through the distinct pathway" EMBO J.13. 1341-1349 (1994)
• [文献書誌] Sada,K.: "Activation of p72syk by thrombin in a cell-free system." Biochem.Biophys.Res.Commun.200. 1-7 (1994)
• [文献書誌] Yang,C.: "Purification and characterization of a protein-tyrosine kinase p72syk from porcine spleen" Eur.J.Biochem.221. 973-978 (1994)
• [文献書誌] Kurosaki,T.: "Syk activation by the src-family tyrosine kinase in the B cell receptor signaling" J.Exp.Med.179. 1725-1729 (1994)
• [文献書誌] Tsubokawa,M.: "CPTK71,a cytosolic protein-tyrosine kinase previously purified from bovine platelets,is identical with p72syk." Biochem.Biophys.Res.Commun.200. 1592-1597 (1994)
• [文献書誌] Qin,S.: "Interleukin 2 Mediates p72syk activation in peripheral blood lymphocytes." FEBS Lett.345. 233-236 (1994)
• [文献書誌] Yanagi,S.: "Translocation,Activation,and Association with PI3 Kinase of p72syk. are early Events during Platelet Activation." Eur.J.Biochem.224. 329-333 (1994)
• [文献書誌] Fujii,C.: "Protein-tyrosine kinase p72syk. is activated by collagen in platelets." Eur.J.Biochem.226. 243-248 (1994)
• [文献書誌] Wang,X.: "Intracellular Calcium Dependent Activation of p72syk in Platelets" J.Biochem.116. 858-861 (1994)
• [文献書誌] Nagai,K.: "p72syk is activated by vanadate plus H202 in porcine platelets and phosphorylates GTPase activating protein on tyrosine residue(s)" J.Biochem.116. 1176-1181 (1994)
• [文献書誌] Tohyama,Y.: "Translocation of p72syk to the Cytoskeleton in Thrombin-Stimulated Platelets." J.Biol.Chem.269. 32796-32799 (1994)
• [文献書誌] Rezaul,K.: "Protein-tyrosine kinase p72syk is activated by platelet activating factor in platelets." Thrombosis and Haemostasis.72. 937-941 (1994)
• [文献書誌] Minami,Y.: "Protein Tyrosine Kinase Syk Is Associated with and Activated by The IL-2 Receptor; Possible Link with The c-myc Induction Pathway." Immunity. (in press).
• [文献書誌] Nagai,K.: "Tyrosine phosphorylation of Shc is mediated through Lyn and Syk in B cell receptor signaing." J.Biol.Chem.(in press).
• [文献書誌] Qin,S.: "Activation and tyrosine phosphorylation of p72syk as well as calcium mobilization after hydrogen peroxide stimulation in peripheral blood lymphocytes" Biochem.J.(in press).
• [文献書誌] 稲津哲也: "実験医学" 羊土社, 2 (1994)
• [文献書誌] 柳茂: "生化学" 日本生化学会, 11 (1994)
• [文献書誌] Yamamura,H.: "The protein kinase Factsbook" Academic Press Limited(in press),