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大腸菌RuvCエンドヌクレアーゼの構造と機能

研究課題

研究課題/領域番号 06276210
研究種目

重点領域研究

配分区分補助金
研究機関大阪大学

研究代表者

岩崎 博史  大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60232659)

研究期間 (年度) 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
1994年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワードRuvCタンパク質 / エンドヌクレアーゼ / Holliday構造 / 遺伝的相同組換え / X線結晶解析 / 三次元構造 / 活性中心 / DNA結晶タンパク質
研究概要

遺伝的相同組換えの中間体は、2種の相同な二重鎖DNAが相互に相補鎖DNAを交換して、X字様となったHolliday構造と呼ばれる構造をしている。大腸菌RuvCタンパク質は、このHolliday構造を切断し組換え産物を生成する際に働くエンドヌクレアーゼで,現在までに,遺伝学的にも生化学的にも相同組換え反応に関与することが証明されているHolliday構造特異的エンドヌクレアーゼは唯一RuvCタンパク質だけである。Holliday構造は,DNAの構造としてもユニークな高次構造をもち,それを認識してDNAの分岐鎖の正確に対称な位置で切断するRuvCエンドヌクレアーゼの基質認識機構や切断メカニズムは非常に興味深い。本研究では、このような特徴を持つRuvCタンパク質の構造と機能との相関関係を解明しようとした。本年度の研究成果は以下のとおりである。
(1)蛋白工学研究所の森川博士との協同研究で、RuvCエンドヌクレアーゼの結晶解析を行い、立体構造を明らかにした。
(2)RuvCミュータントの解析から,3つの機能的なドメイン(エンドヌクレアーゼの活性中心,DNA結合,2量体形成)に関与するアミノ酸残基を同定した。
これらのアプローチによって,RuvCの3次元構造と,機能をうまく説明することができた。

報告書

(1件)
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Shinagawa,H.,Iwasaki,H.: "Molecular mechanisms of Holliday junction processing in Escherichia coli." Advances in Biophysics. (印刷中).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Ariyoshi,M.,et al.: "Atomic structure of the RuvC resolvase:a Holliday junction specific endonuclease from E.coli." Cell. 78. 1063-1072 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Ariyoshi,M.,et al.: "Preliminary crystallographic study of Escherichia coli RuvC protein:an endonuclease specific for Holliday junctions." J.Mol.Biol.241. 281-282 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Takahagi,M.,et al.: "Structual requirements of substrate DNA for binding to and cleavage by RuvC,a Holliday junction resolvase." J.Biol.Chem.269. 15132-15139 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Ishino,Y.,et al.: "Amino acid sequence motifs essential to 3'-5' exonuclease activity of Escherichia coli DNA polymerase II" J.Biol.Chem.269. 14655-14660 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 岩崎博史,品川日出夫: "組換え修復の遺伝学と酵素学" 細胞工学. 13. 720-731 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

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公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

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