血栓症の成因と病態,とくに血液凝固とその制御機構障害への分子生物学的アプローチ

• 研究課題/領域番号: 06404043
• 研究種目: 一般研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 外科学一般
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 松田 道生 自治医科大学, 医学部, 教授 (50048980)
• 研究分担者: 朝倉 伸司 自治医科大学, 医学部, 講師 (70245033) ; 三室 淳 自治医科大学, 医学部, 講師 (10221607) ; 諏合 輝子 自治医科大学, 医学部, 講師 (60183844) ; 坂田 洋一 自治医科大学, 医学部, 助教授 (40129028)
• 研究期間 (年度): 1994 – 1995
• 研究課題ステータス: 完了 (1995年度)
• 配分額: 17,500千円 (直接経費: 17,500千円); 1995年度: 4,500千円 (直接経費: 4,500千円); 1994年度: 13,000千円 (直接経費: 13,000千円)
• キーワード: フィブリノゲン / 遺伝性異常フィブリノゲン / フィブリン重合反応 / 架橋形成 / カルシウム依存性構造 / モノクロナール抗体 / 細胞接着 / 接着分子 / モノクローナル抗体 / 遺伝性フィブリノゲン異常症 / 出血 / 血栓 / 創傷治癒不全 / 接着分子のレセプター

研究概要

1.2年に亘る本研究補助金を受けて、国内外から構造解析を依頼された異常フィブリノゲン(Fbg)10余家系について検索を進めた。この中Kurashiki l(γGly-268→Glu,ホモ接合体,Blood印刷中)とKamogawa(γArg-275→Ser,国際血栓止皿学会で報告後,投稿準備中)では全く新しい変異型が同定され,共に最近提唱されたD:D self-association siteの異常が判明した.Dドメインのフィブリン(Fbn)重合反応基に少なくとも2種であることを明らかにした点で重要な情報と考える.又,血栓症を伴うKumamotoではA αArg-19→Glyが同定され,Fbg→Fbn転換後に新たに露呈される所謂Asiteの異常によりFbn重合障害がある.またFbnへのトロンビン結合能も低下しており,形成されたFbn血栓にトロンビンを局在化して血栓形成を自己制御する機構の障害から血栓症に結びついたものと考えられた.Aα鎖150アミノ酸残基を欠くMarburg lではXIIIa因子による架橋形成の異常が認められ出血,血栓,創傷治癒障害との関係の検索を続けている(第3回国際XIII因子カンファランスで報告).
Fbg/Fbnの特異な構造を認識するモノクロナル抗体:3種類の抗体が得られた.(1)DドメインのCa^<++>依存性構造を認識する抗体で,単にFbg/Fbnの構造機能関係の解析だけでなく,これを担体とする免疫親和性クロマトグラフィーにより高純度のFbgを単一の操作で精製できた.実際,試料の限られた患者検体からの精製に応用した.

研究成果

• [文献書誌] Shosaku Nomura: "β2-glycoprotein and anticardiolipin antibody influence factor Xa generation but not factor Xa binding to platelet derived microparticles." Thromb.Haemost.71(4). 526-530 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nobuhiko Yoshida: "Effect calcium on the mobility of γ-chain from fibrinogen Osaka V on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis." Thromb.Res.73(1). 79-82 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kunihiko Umezawa: "Localization of vitronectin-and fibronectin-receptors on cultured human glioma cells." Brain Res.659. 23-32 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Teruko Sugo: "Activation of prothrombin by factor Xa bound to the membrane surface of human umbilical vein endothelial cells:lts catalytic efficiency is similar to that of prothrombinase complex on platelets." J.Biochem.117. 244-250 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Mikhiro Takebe: "Calcium-dependent monoclonal antibody against human fibrinogen:preparation,characterization,and application to fibrinogen purification." Thromb.Haemost.73(4). 662-667 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A rapid latex immunoassay for the detection of plasmin-α2-plasmin inhibitor complex:Utilization of two monoclonal antibodies differentially recognizing respective components of the complex." Blood Coagulation and Fibrinolysis. 6. 249-258 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Michael W.Mosesson: "The role fibrinogen D domain intermolecular association sites in the polymerization of fibrin and fibrinogen Tokyo ll(γ275→Cys)." J.Clin.lnvest.96. 1053-1058 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Shinji Asakura: "New functions of kininogen." Jpn.J.Thromb.Hemato.6(3). 155-166 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Teruko Sugo: "Calcium ion binding to vitamin K-dependent clotting factors." Jpn.J.Thromb.Hematol.6 (4). 252-264 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Matsuda Michio: "Hereditary dysfibrinogens with special reference to their structure-function relationship." lnt.J.Hematol. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kazuki Niwa: "AγGly-268 to Glu substitution is responsible for impaired fibrin assembly in a homozygous dysfibrinogen Kurashiki l." Blood. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A monoclonal antibody theat recognizes a neo-antigen exposed in the E domain of fibrin monomer complexed with fibrinogen or its derivatives.lts application to the measurement of soluble fibrin in plasma." Blood. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nomura, S., Fukuhara, S., Komiyama, Y., Takahashi, H., Matsuura, E., Nakagaki, T., Funatsu, A., Sugo, T., Matsuda, M., Koide, T.: "beta2-glycoprotein I and anticardiolipin antibody influence factor Xa generation but not factor Xa binding to platelet derived microparticles." Thromb.Haemost.1 (4). 526-530 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Yoshida, N., Hirata, H., Imaoka, S., Matsuda, M., Yamazumi, K.and Asakura, S.: "Effect of calcium on the mobility of gamma-chain from fibrinogen Osaka V on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis." Thromb.Res.73 (1). 79-82 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Umezawa, K., Asakura, S., Jin, Y-M.and Matsuda, M.: "Localization of vitronectin-and fibronectin-receptors on cultured human glioma cells" Brain Res.659. 23-32 (1994)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Sugo, T., Nakamikawa, C., Tanabe, S.and Matsuda, M.: "Activation of prothrombin by factor Xa bound to the membrane surface of human umbilical vein endothelial cells : Its catalytic efficiency is similar to that of prothrombinase complex on platelets." J.Biochem.117. 244-250 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takebe, M., Soe, G., Kohno, I., Sugo, T.and Matsuda, M.: "Calcium-dependent monoclonal antibody against human fibrinogen : preparation, characterization, and application to fibrinogen purification" Thromb.Haemost.73 (4). 662-667 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Soe, G., Kohno, I., Inuzuka, K.and Matsuda, M.: "A rapid latex immunoassay for the detection of plasmin-alpha2-plasmin inhibitor complex : Utilization of two monoclonal antibodies differentially recognizing respective components of the complex." Blood Coagulation and Fibrinolysis. 6. 249-258 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Mosesson MW,Siebenlist KR,DiOlio JP,Matsuda M,Hainfeld JF,Wall JS: "The role of fibrinogen D domain intermolecular association sites in the polymerization of fibrin and fibrinogen Tokyo II (gamma257*Cys)." J.Clin.Invest.96. 1053-1058 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Asakura, S.: "New Functions of Kininogen." Jpn.J.Thromb.Hemost.6 (3). 155-166 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Sugo, T.: "Calcium ion binding to vitamin K-dependent clotting factors." Jpn.J.Thromb.Hemost.6 (4). 252-264 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Matsuda, M.: "Hereditary dysfibrinogens with special reference to their structure-function relationship." Int.J.Hematol.(in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Niwa, K., Takebe, M., Sugo, T., Kawata, Y., Mimuro, J., Sakata, Y., Mizushima, J., Maeda, A., Endo, H.and Matsuda, M.: "A gammaGly-268 to Glu substitution is responsible for impaired fibrin assembly in a homozygous dysfibrinogen Kurashiki I." Blood. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Soe, G., Kohno, I., Inuzuka, K., Itoh, Y.and Matsuda M.: "A monoclonal antibody that recognizes a neo-antigen exposed in the E domain of fibrin monomer complexed with fibrinogen or its derivatives. Its application to the measurement of soluble fibrin in plasma" Blood. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Teruko Sugo: "Activation of prothrombin by factor Xa bound to the membrane surface of human umbilical vein endothlial cells : Its catalyic efficiency is similar to that of prothrombinase complex on platelets" J. Biochem.117. 244-250 (1995)
• [文献書誌] Mikihiro Takebe: "Calsiumdepentent monoclonal antibody against human fibrinogen : preoaration, characterization, and application to fibrinogen purification." Thromb. Haemost.73(4). 662-667 (1995)
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A rapid latex immunoassay for the edtection of plasmin-α2-plasmin inhibitor complex : Utilization of two monoclonal antibodies differentially recognizing respective omponents of the complex." Blood Coagulation and Fibrinolysis. 6. 249-258 (1995)
• [文献書誌] Michael W. Mosesson: "The role of fibrinogen D domain intermolecular association sites in the polymerization of fibrin and fibrinogen Tokyo II (γ275→Cys)." J. clin. Invest.96. 1053-1058 (1995)
• [文献書誌] Sinnji Asakura: "New functions of kininogen." Jpn. J. Thromb. Hematol.6(3). 155-166 (1995)
• [文献書誌] Teruko Sugo: "Calusium ion binding to vitamin K-dependent clotting factors." Jpn. J. Thromb. Hematol.6(4). 252-264 (1995)
• [文献書誌] Matsuda Michio: "Hereditary dysfibrinogens with special reference to their structure-function relationship." Int. J. Hematol.(in press).
• [文献書誌] Kazuki Niwa: "A γGly-268 to Glu substitution is responsible for impared fibrin assembly in a homozygous dysfibrinogen Kurashiki I." Blood. (in press).
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A monoclonal antibody that recognizes a neo-antigen exposed in the E domain of fibrin monomer complexed with fibrinogen or its derivatives. Its application to the measurement of soluble fibrin in plasma." Blood. (in press).
• [文献書誌] Kunihiko Umezawa: "Localization of vitronectin‐ and fibronectin‐receptors on cultured human glioma cells." Brain Research. 659. 23-32 (1994)
• [文献書誌] Teruko Sugo: "Activation of prothrombin by factor Xa bound to the membrane surface of human umbilical vein endothelial cells:its catatytic efficiency is similar to that of prothrombinase complex on platelets." J.Biochem.117. 244-250 (1995)
• [文献書誌] Mikihiro Takebe: "Calcium‐dependent monoclonal antibody against human fibrinogen:preparation,characterization,and application to fibrinogen purification." Thromb.Haemost.(in press.).
• [文献書誌] Gilbu Soe: "A rapid latex immunoassay for the detection of plasmin‐α2‐plasmin inhibitor complex:Utilization of two monoclonal antibodies differentially recognizing respective components of the complex." Blood Coagulation & Fibrinolysis. (in press.).