| 研究課題/領域番号 |
06454025
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
動物生理・代謝
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
鈴木 範男 北海道大学, 大学院理学研究科, 教授 (20082133)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
7,200千円 (直接経費: 7,200千円)
1995年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1994年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
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| キーワード | 膜結合型グアニル酸シクラーゼ / cGMP / リン酸化ペプチド / ホスホセリン / 精子 / ウニ / 情報伝達 / S-エチルシスティン / リン酸化部位 / バフンウニ / アミノ酸分析 |
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| 研究概要 |
精製した膜結合型グアニル酸シクラーゼ中のホスフォアミノ酸の分析はフェニルチオカルバミル(PTC)化して行った。この分析の検出感度約10pmolで、3種類のホスフォアミノ酸を検出することができた。ホスフォセリンを含んでいるペプチドあるいはタンパク質をS-エチルシステイン化し、タンパク質シーケンサーによって分析したが、キナーゼの合成基質であるkemptideとリン酸化kemptideを用いた実験では有効に働いたがウニ精子の膜結合型グアニル酸シクラーゼ由来のリン酸化ペプチドではうまく働かなかった。従って、酵素をリシルエンドペプチダーゼ消化し、ペプチドをSuperdex HR10/30 columnを用いたゲルろ過で精製し、ペプチド性リンを含む分画をChelating Sepharose FF columnを用いたFe^<3+>-affinity chromatographyで特異的に精製した。その結果、ホスフォセリンを含む以下のようなペプチドが得られた:(534)RAYEAALDSLVWK(546)(400pmol);(651)GSLQDILENDDIK(663)(1,500pmol);(679)GIVYLHSSEIK(689)(800pmol);(696)SSNCVVDNRWVLQITDYGLNEFK(718)(450pmol);(883)TEQLLHRMLPPSIASQLIK(901)(750pmol)。kinase-like domainに位置するペプチドが4つにcatalytic domainに位置するペプチドが1つであった。
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