| 研究課題/領域番号 |
06454133
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用獣医学
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
川村 清市 北里大学, 獣医畜産学部, 教授 (60050530)
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| 研究分担者 |
星 史雄 北里大学, 獣医畜産学部, 講師 (00219164)
日笠 喜朗 北里大学, 獣医畜産学部, 助教授 (30165071)
樋口 誠一 北里大学, 獣医畜産学部, 助教授 (60095510)
高瀬 勝晤 北里大学, 獣医畜産学部, 教授 (40050596)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
6,900千円 (直接経費: 6,900千円)
1995年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1994年度: 5,700千円 (直接経費: 5,700千円)
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| キーワード | インシュリン / 成長ホルモン / チロキシン(T_4) / 酵素抗体法 / ABC法 / ホルモン測定 / 牛(ウシ) / ウシ / チロキシン(T4) / 酵素抗体法(ELISA) / 内分泌 / ホルモンの分離精製法 |
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| 研究概要 |
著者らは、ウシの代謝性ホルモン、特に成長ホルモン(bGH)、インスリンおよび甲状腺ホルモン(T_4)を獣医臨床現場で応用可能な検査法として、radioimmunoassay(RIA)法以外の方法で、かつ測定の正確性と反応感度に優れたEnzyne Immunosorbentassay System(EIA法測定システム)を開発するために、ウシ体内組織からの各ホルモンの高純度分離精製法ならびにEIA法を応用した各血清ホルモン値の測定法について検討し、以下に示す知見を得た。
1.ウシの下垂体、膵臓および甲状腺からBGH、インスリン、チロキシン(T_4)を分離し、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)および/またはゲル濾過法による精製を実施したところ、何れも極めて精製純度の高い単一成分を分離できた。
2.これらの各分画をSDS‐PAGE、等電点、イムノブロッテイング法などにより解析したところ、各蛋白分画は何れも精製純度の高い各ホルモンであった。
3.次いで、これらの各ホルモンの免疫学的測定法を確立するために、まず、Avidin‐Biotin Complex(ABC)法およびAlkaline Phosphatase(ALP)を用いた吸光測定によるEIA法・サンドウイッチ法による基本的なアッセイ系の反応条件を検討した。その結果、再現性の高い安定な測定成績を得た。
4.EIA法により健康牛や病傷牛などの血清中のbGH、インスリン、T_4濃度を測定し、RIA法による濃度と相関性の高い成績を得た。しかし、低濃度領域におけるインスリン・bGHの測定値では精度の高い成績を得ることができなかった。
5.したがって、EIA法によるこれらのホルモンの血清中濃度測定に当たっては、抗体の固相化法および血清処理法についてさらなる検討が必要と思われた。
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