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ヒトにおける紫外線損傷修復機構のタンパクレベルの研究

研究課題

研究課題/領域番号 06454637
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 環境影響評価(含放射線生物学)
研究機関金沢大学

研究代表者

二階堂 修  金沢大学, 薬学部, 教授 (60019669)

研究分担者 石垣 靖人  金沢大学, 薬学部, 教務職員 (20232275)
鈴木 文男  金沢大学, 薬学部, 助教授 (10019672)
研究期間 (年度) 1994 – 1995
研究課題ステータス 完了 (1995年度)
配分額 *注記
6,300千円 (直接経費: 6,300千円)
1995年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1994年度: 4,300千円 (直接経費: 4,300千円)
キーワード損傷認識タンパク / シクロブタン型チミン二量体 / (6-4)光産物 / GAPD / 相補性群 / 損傷修復 / ヒト細胞 / 試験館内修復合成
研究概要

本研究では、紫外線によって照射されたヒト細胞におけるDNA修復過程をタンパク分子レベルで研究することを目的とした。ヒト細胞核抽出液中から損傷の認識に携わるタンパクを分離するため、紫外線照射されたDNA断片によるゲルシフト法を用いて実験を行った。
HeLa細胞核抽出液をヘパリン・カラムで分画したところ、第10番分画(NF-10)に紫外線照射DNAに結合するタンパク分子が存在していた。さらに精製を進めたところ、ポリアクリルアミド電気泳動で約40kDaの分子量を示す単一タンパク分子を得た。この精製NF-10タンパクは、紫外線損傷を有するDNAに特異的に結合した。その結合は紫外線によってDNAに生成された(6-4)光産物を介することが分かった。ついでNF-10タンパクを特異的に認識するモノクローナル抗体を樹立し、試験管内修復系に添加したところ、修復合成が抑制された。また、XPの全ての相補性群細胞抽出液にNF-10タンパクが存在していたことから、このタンパクはこれまでに報告されていない新しい損傷認識タンパクであることが分かった。
NF-10タンパクのアミノ酸配列を解析したところ、グリセラデルハイド3'-フォスフェート・デハイドロゲナーゼ(GAPD)と一致した。またNF-10タンパクはGAPD活性を示した。GAPDの補酵素であるNADP^+がNF-10タンパクと紫外線照射DNAとの結合を競合的に阻害したことから、NF-10タンパクはNADP^+分子種を認識すると同様な機構でDNA中の(6-4)光産物を認識していることが示唆された。今後は、NF-10タンパクに結合する関連タンパクの分離を行ない、NF-10タンパクの紫外線損傷修復過程への関与について詳細な解析を行う予定である。

報告書

(3件)
  • 1995 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (42件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (42件)

  • [文献書誌] T.Itoh: "Rodent complementation group 8(ERCC8) corresponds to Cockayene syndorme complementation group A." Mutation Research. 35(in press). (1996)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Wakasugi: "Purification of a novel UV-damaged DNA binding protein highly specific to (6-4) photoproducts." Nucleic Acids Research. 35(in press). (1996)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] C.A.Chadwick: "The detection of cyclobutane thymine dimers,(6-4) photolesions and the Dewar photoisomers in sections of UV-irradiated human skin using specific antibodies,and the demonstration of depth penetration effects." Journol of Photochemistry and Photobiology,B : Biology. 28. 163-170 (1995)

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  • [文献書誌] H.Nakane: "High incidence of ultraviolet-B-or chemical-carcinogen-induced skin tumors in mice lacking the xeroderma pigmentosum group A gene." Nature. 377. 165-168 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] P.H.Clingen: "Correlation of UVC and UVB cyctotoxicity with the induction of specific photoproducts in Tlymphocytes and fibroblasts from normal human donors." Photochemistry and Photobiology. 61. 163-170 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] E.Eveno: "Different removal of UV-photoproducts in gentically-related xeroderma pigmentosum and trichothiodystrophy diseases." Cancer Research. 55. 4325-4332 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Shimizu: "A specific chromosome change and distinctive transforming genes are necessary for malignant progression of spontaneous transformation in cultured Chinese hamster embryo cells." Japanese Journal of Cancer Research. 86. 546-554 (1995)

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  • [文献書誌] T.Funayama: "Photorepair and excision repair removal of UV-induced pyrimidine dimers and (6-4) photoproducts in the tail fin of the Medaka,Oryzias latipes." Journal of Radiation Research. 35. 139-146 (1994)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] X.Qin: "Detection of active UV-photoproduct repair in monkey skin in vivo by quantitative immuno-histochemistry." Cancer Letter. 15. 291-298 (1994)

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  • [文献書誌] H.Morikawa: "Cloning of VH and VL genes for antibodies specific for pyrimidine photo dimers." Nucleic Acids Symposium Series. 29. 111-112 (1994)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] A.A.Vink: "Removal of UV-induced DNA lesions in mouse epidermis soon after irradiation" Journal of Photochemistry and Photobiology,B.24. 25-31 (1994)

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  • [文献書誌] T.Mori: "Characterization of three cloned cell lines from a N-nitorosobis (2-hydoroxypropyl) amine-induced transplantable hamster pancreatic ductal adenocarcinoma." International Journal of Pancreatology. 293. 143-150 (1994)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 鈴木 文男: "アポトーシスの分子医学(p53と癌とアポトーシス)" 羊土社, 14 (1994)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 鈴木 文男: "動物細胞代替法マニュアル(テトラゾリウム塩を用いた毒性試験法(MTT法))" 共立出版社, 11 (1994)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 二階堂 修: "抗変異原・抗発がん物質とその検索方法(DNA修復の検出)" 講談社, 11 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Wakasugi: "Purificationa of a novel UV-demaged-DNA binding protein highly spevific for (6-4) photoproducts" Nucleic Acids Res.(in press.).

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S.Nakamura: "Assembly and function of Chlamydomonas flagellar mastigonemed as probed with a monoclonal antibody." J.Cell Sci.(in press.).

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Itoh.: "Rodent complementation group 8 (ERCC8) corresponds to Cockayne syndorme complementation group A." Mutation Res.(in press.).

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] R.M.Taylor: "Ultraviolet-B-induced DNA lesions and their removal in wheat (Triticum aestivum L.) leaves. Plant." Cell and Environ.19. 171-181 (1996)

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    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Shimizu: "A specific chromosome change and distinctive transforming genes are necessary for malignant progression of spontaneous transformation in cultured Chinese hamster embryo cells." Jpn J.Cancer Res.86. 546-554 (1995)

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    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] E.Eveno: "Different removal of UV-photoproducts in gentically-related xeroderma pigmentosum and trichothiodystrophy diseases." Cancer Res.55. 4325-4332 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] P.H.Clingen: "Correlation of UVC and UVB cyctotoxicity with the induction of specific photoproducts in T-lymphocytes and fibroblasts from normal human donors." Photochem. Photobiol.61. 163-170 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] H.Makane: "High incidence of ultraviolet-B-or chemical-carcinogen-induced skin tumors in mice lacking the xeroderma pigmentosum group A gene" Nature. 377. 165-168 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] C.A.Chadwick: "The detection of cyclobutane thymine dimers, (6-4) photolesions and the Dewar photoisomers in sections of UV-irradiated human skin using specific antibodies, and the demonstration of depth pemetration effects" J.Photochem. Photobiol., B : Biology. 28. 163-170 (1995)

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] O.Nikaido: "Detection of the Dewar photoproducts in solar light-exposed DNA by a damage specific monoclonal antibody and the repair of the photoproducts in human cells" In "The 13th UOEH International Symposium & The 2nd Pan Pacific Cooperative Symposium on Impact of Increased UV-Exposure on Human Health and Ecosystem" (Eds by Y.Kodama and Si Duk Lee. (1994, University of Occupational and Environmental Health). 190-193

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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Funayama: "Photorepair and excision repair removal of UV-induced pyrimidine dimers and (6-4) photoproducts in the tail fin of the Medaka, Oryzias latipes." J.Radiat. Res.35. 189-146 (1994)

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    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] X.Qin: "Detection of active UV-photoproduct repair in monkey skin in vivo by quantitative immunohisto-chemistry" Cancer Lett.15. 291-298 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] A.A.Vink: "Removal of UV-induced DNA lesions in mouse epidermis soon after irradiation" J.Photochem. Photobiol. B.24. 25-31 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Itoh: "Rodent complementation group 8(ERCC8)corresponds to Cockayene syndorme complementation group A." Mutation Research. 35(in press). (1996)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] M.Wakasugi: "Purification of a novel UV-damaged DNA binding protein highly specific to (6-4)photoproducts." Nucleic Acids Research. 35(in press). (1996)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] C.A.Chadwick: "The detection of cyclobutane thymine dimers,(6-4)photolesions and the Dewar photoisomers in sections of UV-irradiated human skin using specific antibodies,and the demonstration of depth penetration effects." Journal of Photochemistry and Photobiology,B:Biology. 28. 163-170 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] H.Nakane: "High incidence of ultraviolet-B- or chemical-carcinogen-induced skin tumors in mice lacking the xeroderma pigmentosum group A gene." Nature. 377. 165-168 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] P.H.Clingen: "Correlation of UVC and UVB cyctotoxicity with the induction of specific photoproducts in T-lymphocytes and fibroblasts from normal human donors." Photochemistry and Photobiology. 61. 163-170 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] E.Eveno: "Different removal of UV-photoproducts in gentically-related xeroderma pigmentosum and trichothiodystrophy diseases." Cancer Research. 55. 4325-4332 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] T.Shimizu: "A specific chromosome change and distinctive trransforming genes are necessary for malignant progression of spontaneous transformation in cultured Chinese hamster embryo cells." Japasnese Journal of Cancer Research. 86. 546-554 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] T.Funayama: "Photorepair and excision repairl removal of UV-induced pyrimidine dimers and(6-4)photoproducts in the tail fin of the Medaka,Oryzias latipes." Journal of Rsadiation Research. 35. 139-146 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] X.Qin: "Detection of active UV-photoproduct repair in monkey skin in vivo by quantitative immuno-histochemistry." Cancer Letter. 15. 291-298 (1994)

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      1994 実績報告書
  • [文献書誌] H.Morikawa: "Cloning of VH and VL genes for antibodies specific for pyrimidine photo dimers." Nucleic Acids Symposium Series. 29. 111-112 (1994)

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      1994 実績報告書
  • [文献書誌] A.A.Vink: "Removal of UV -induced DNA lesions in mouse epidermis soon after irradiation" Journal of Photochemistry and Photobiology,B. 24. 25-31 (1994)

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      1994 実績報告書
  • [文献書誌] T.Mori: "Characterization of three cloned cell lines from a N-nitorosobis (2-hydoroxypropyl)amine-induced transplantable hamster pancreatic ductal adenocarcinoma." International Journal of Pancreatology. 293. 143-150 (1994)

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      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 鈴木文男: "アポトーシスの分子医学" p53と癌とアポトーシス(羊土社), 14 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 鈴木文男: "動物細胞代替法マニュアル" テトラゾリウム塩を用いた毒性試験法(MTT法)(共立出版社), 11 (1994)

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      1994 実績報告書

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公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

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