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血小板凝集の調節作用を持つ生理活性タンパク質の構造-機能相関

研究課題

研究課題/領域番号 06454646
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 構造生物化学
研究機関藤田保健衛生大学

研究代表者

千谷 晃一  藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (60179942)

研究分担者 藤村 吉博  奈良県立医科大学, 輸血部, 教授 (80118033)
林 宣宏  藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (80267955)
松井 太衛  藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (90183946)
研究期間 (年度) 1994 – 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
6,800千円 (直接経費: 6,800千円)
1996年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1995年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1994年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
キーワード血小板粘着・凝集 / フォンビルブランド因子 / vWF活性化因子 / GPIb結合タンパク質 / 細胞外マトリックス / III型コラーゲン / 血小板凝集 / フォンビルブラント因子 / 血小板膜糖タンパク質(GP)Ib / ボトロセチン / ジャララカ GPIb-BP / アルボアグレギン-B / マムシギン / ビチスセチン / ジャララカGPIb-BP / トカラセチン / フラボセチンA,B / ビチスチン / ボトロンビン / フィブリノーゲン / コラーゲン / 高分子量出血性メタロプロテアーゼ / ジスインテグリン
研究概要

1)血小板粘着、凝集を調節する種々の蛇毒タンパク質の精製と構造-機能相関:既にBothrops jararaca蛇毒よりフォンビルブランド因子(vWF)を活性化し、血小板凝集を惹起するボトロセチンの精製とそのユニークな全化学構造の解析に成功しているが、本研究では同じ蛇毒から、トロンビン様活性をもつボトロンビン、コラーゲン惹起血小板凝集を阻害するジャララギン-C、血小板GPIbと特異的に結合して、vWFと血小板の結合を阻害するジャララカGPIb-BP(別名ヨシトビン)など作用の異なる種々のタンパク質性因子を精製し、その全アミノ酸配列を決定した。GPIb結合タンパク質は別種の蛇毒からも単離し、それらの構造を詳細に比較検討するとともに、それらの構造-機能相関に関する知見を得た。このほか、Bitis arietansの蛇毒中に強いボトロセチン様活性を検出し、ビチスセチンと命名した。単離後全一次構造を決定した。ボトロセチンとの相同性は45%と低く、両者でその作用機序が異なることを示唆した。2)vWFの生理的活性化分子の探索:ボトロセチンに対して作製したモノクロナール抗体の1種(BCT-4-3)がヒト血管内皮細胞に反応性を示し、その反応はフィブロネクチンの添加により増加した。臍帯抽出液より、BCT-4-3固定化カラムを用い、ボトロセチン疑似分子を精製したところ、フィブロネクチンと130kDaタンパク質が抽出され、これらの複合体が生理的vWF活性化分子であると推定した。3)vWFと細胞外マトリックス成分との結合:vWFとマトリックス構成タンパク質との結合をELISA系で調べたところ、III型コラーゲンのみが特異的に結合することが判明した。しかし、静的状態ではその結合によりvWFとGPIbの細胞外ドメインに相当するグリコカリシンとの結合は惹起されなかった。このことは、その結合はさらに動的状態におけるずり応力などの変化が必要であることを示唆するものである。

報告書

(4件)
  • 1996 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1995 実績報告書
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (65件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (65件)

  • [文献書誌] Ozeki,Y.et al.: "C-type Galactoside-binding Lectin from Bothrops jararaca Venom : Comparison of its Structure and Function with Botrocetin" Arch.Biochem.Biophys.308. 306-310 (1994)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nishida,S.et al.: "Purification and Characterization of Bothrombin,a Fibrinogen-Clotting Serine Protease from the Venom of Bothrops jararaca." Biochemistry. 33. 1843-1849 (1994)

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  • [文献書誌] Usami,Y.et al.: "A 28kDa-protein with Disintegrin-like Structure (Jararhagin-C) Purified from Bothrops jararaca Venom Inhibits Collagen-and ADP induced Platelet Aggregation." Biochem.Biophys.Res.Commun.201. 331-339 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miura,S.et al.: "Structural Elements Influencing von Willebrand Factor (vWF) Binding Affinity for Platelet Glycoprotein Ib within a Dispase-digested vWF Fragment." Blood. 84. 1553-1558 (1994)

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  • [文献書誌] Katayama,M.et al.: "Immuno-enzymometric Analysis for Plasma von Willebrand Factor Degradation in Diabetes Millitus Using Monoclonal Antibodies" Clinical Biochem.27. 123-131 (1994)

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  • [文献書誌] 千谷晃一: "構造と機能からみた蛋白デザインとその臨床応用(第35回総会特別講演)" 臨床血液. 35. 323-331 (1994)

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  • [文献書誌] Katayama,M.et al.: "Fibronectin and 130-kDa Molecule Complex Mimics Snake Venom Botrocetin-like Structure Potentially Modulating Association between von Willebrand Factor and Vascular Vessel Wall." J.Biochem.117. 331-338 (1995)

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  • [文献書誌] Shima,M.et al.: "ABO Blood Group Genotype and Plasma von Willebrand Factor in Normal Individuals." Vox Sang.68. 236-240 (1995)

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  • [文献書誌] Fujimura,Y.et al.: "Isolation and Characterization of jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Antagonist Specific to Platelet Glycoprotein Ib." Thromb.Haemost.74. 743-750 (1995)

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  • [文献書誌] Kawasaki,T.et al.: "Tokaracetin,a New Platelet Antagonist That Binds to Platelet Glycoprotein Ib and Inhibits von Willebrand Factor-dependent Shear-induced Platelet Aggregation." Biochem.J.308. 947-953 (1995)

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  • [文献書誌] Taniuchi,Y.et al.: "Flavocetin-A and B,Two High Molecular Mass Glycoprotein Ib Binding proteins. with High Affinity,Purified from Trimeresurus flavoviridis Venom,Inhibit the Platele Aggregation at High Shear Stress." Biochem.Biophys.Acta. 1244. 331-338 (1995)

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  • [文献書誌] 藤村吉博他: "von Willebrand因子と血小板の結合反応を制御する蛇毒蛋白質の構造と機能(総説)" 日本血栓止血学会会誌. 6. 237-251 (1995)

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  • [文献書誌] Ishibashi,T.,et al: "Functional Significance of Platelet Membrane Glycoprotein P62 (GPVI) a Putative Collagen Receptor" Int.J.Hematol.62. 107-115 (1995)

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  • [文献書誌] 松井太衛: "von Wiilebrand因子の糖鎖の構造と機能" 日本血栓止血学会会誌. 6. 421-432 (1995)

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  • [文献書誌] Usami,Y.,et al.: "Primary Structure of Alboaggregin-B Purified from the Venom of Trimeresurus albolabris." Biochem.Biophys.Res.Commun.219. 727-733 (1996)

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  • [文献書誌] Kawasaki,T.,et al.: "Complete Amino Acid Seguence and Identification of the Platelet GPIb Binding Site of Jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Protein Isolated from Bothrops jararaca." J.Biol.Chem.271. 10635-10639 (1996)

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  • [文献書誌] Fujimura,Y.,et al.: "Snake Venom Proteins Modulating Interaction Between von Willebrand Factor and Platelet Glycoprotein Ib (Review)." Thromb.Haemost.76. 633-639 (1996)

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  • [文献書誌] Hamako,J.,et al.: "Purification,and Characterization of Bitiscetin,a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein from Bitis arietans snake Venom." Biochem.Biophys.Res.Commun.226. 273-279 (1996)

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  • [文献書誌] Matsui,T.,et al.: "Interaction of von Willebrand Factor with the Extracellular Matrix and Glycocalicin under Static Conditions." J.Biochem.121. 376-381 (1997)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsui,T.,et al.: "Complete Amino Acid Seguence of Bitiscetin,a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein,Purified from Snake Venom of Bitis arietans." Res.Commun.Cell Mol.Biol.in press. (1997)

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  • [文献書誌] Fujimura,Y.,et al.: "Structure of Snake Venom Protein Modulating the Interaction between von Willlebrand Factor and Platelets." Proc.of Hirosaki Symp. in von Willebrand Factor. in press. (1997)

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  • [文献書誌] Fujimura,Y.and Titani,K.: "Haemostasis and Thrombosis,Third Edition Volume 1 (Bloom,A.L.Forbes,C.D.,Thomas,D.P.,and Tudennam, E. G. D. Ed.)" Churchill Livingstone,Edinburgh,717 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 松井太衛: "Annual Review 血液1995(高久、宮崎、斎藤、溝口編)" 中外医学社、東京, 327 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsui,T.,and Titani,K.: "Methods and Protocols (Rhodes, J.,and Milton,J.D.Ed.)" Humana Press,Totowa,NJ Methods in Molecular Medicine,Lectins, (1997)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ozeki, Y.et al.: "C-type Galactoside-binding Lectin from Bothrops jararaca Venom : Comparison of Its Structure and function with Botrocetin" Arch.Biochem.Biophys. 308. 306-310 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nishida, S.et al.: "Purification and Characterization of Bothrombin, a Fibrinogen-Clotting serine Protease from the Venom of Bothrops jararaca." Biochemistry. 33. 1843-1849 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Usami, Y.et al.: "A 28kDa-protein with Disintegrin-like Structure (Jararhagin-C) Purified from Bothrops jararaca Venom Inhibits Collagen-and ADP-induced Platelet Aggregation." Biochem.Biophys.Res.Commun. 201. 331-339 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miura, S.et al.: "Structural Elements Influencing von Willebrand Factor (vWF) Binding Affinity for Platelet Glycoprotein Ib within a Dispase-digested vWF Fragment" Blood. 84. 1553-1558 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Katayama, M.et al.: "Immuno-enzymometric Analysis for Plasma von Willebrand Factor Degradation in Diabetes Militus Using Monoclonal Antibodies" Clinical Biochem. 27. 123-131 (1994)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Katayama, M.et al.: "Fibronectin and 130-kDa Molecule Complex Mimics Snake Venom Botrocetin-like Structure Potentially Modulating Association between von Willebrand Factor and Vascular Vessel Wall." J.Biochem. 117. 331-338 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shima, M.et al.: "ABO Blood Group Genotype and Plasma von Willebrand Factor in Normal Individuals" Vox Sang. 68. 236-240 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujimura, Y.et al.: "Isolation and Characterization of jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Antagonist Specific to Platelet Glycoprotein Ib." Thromb.Haemost. 74. 743-750 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kawasaki, T.et al.: "Tokaracetin, a New Platelet Antagonist That Binds to Platelet Glycoprotein Ib and Inhibits von Willebrand Factor-dependend Shear-induced Platelet Aggregation." Biochem.J.308. 947-953 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Taniuchi, Y.et al.: "Flavocetin-A and B,Two High Molecular Mass Glycoprotein Ib Binding Proteins. with High Affinity, Purified from Trimeresurus flavoviridis Venom, Inhibit the Platelet Aggregation at High Shear Stress." Biochem.Biophys.Acta. 1244. 331-338 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ishibashi, T., et al.: "Functional Significance of Platelet Membrane Glycoprotein P62 (GPVI) a Putative Collagen Receptor" Int.J.Hematol. 62. 107-115 (1995)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Usami, Y., et al.: "Primary structure of Alboaggregin-B Purified from the Venom of Trimeresurus albolabris." Biochem.Biophys.Res.Commun.219. 727-733 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kawasaki, T., et al.: "Complete Amino Acid Sequence and Identification of the Platelet GPIb Binding Site of Jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Protein Isolated from Bothrops jararaca." J.Biol.Chem.271. 10635-10639 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujimura, Y., et al.: "Snake Venom Proteins Modulating Interaction Between von Willebrand Factor and Platelet Glycoprotein Ib (Review)" Thromb.Haemost.76. 633-639 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hamako, J., et al.: "Purification, and Characterization of Bitiscetin, a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein from Bitis arietans Snake Venom." Biochem.Biophys.Res.Commun.226. 2732-79 (1996)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsui, T., et al.: "Interaction of von Willebrand Factor with the Extracellular Matrix and Glycocalicin under Static Conditions." J.Biochem.121. 376-381 (1997)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsui, T., et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Bitiscetin, a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein, Purified from Snake Venom of Bitis arietans." Res.Commun.Cell Mol.Biol.(in press). (1997)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujimura, Y., et al.: "Structure of Snake Venom Protein Modulating the Interaction between von Willlebrand Factor and Platelets." Proc.of Hirosaki Symp.on von Willebrand Factor. (in press). (1997)

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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsui, T., and Titani, K: "Chapter 19.ABO (H) blood group expression on circulating glycoproteins." Humana Press, Totowa, NJMethods in Molecular Medicine, Lectins Methods and Protocols (Rhodes, J., and Milton, J.D.Ed.). (in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujimura, Y.and Titani, K.: Haemostasis and Thrombosis, Third Edition Volume 1 (Bloom, A.L., Forbes, C.D., Thomas, D.P., and Tuddenham, E.G.D.Ed., Chapter 16. Structure and function of von Willebrand factor.Churchill Livingstone, Edinburgh, 717 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Usami, Y., et al.: "Primary Structure of Alboaggregin-B Purified from the Venom of Trimeresurus albolabris." Biochem. Biophys. Res. Commun.219. 727-733 (1996)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kawasaki, t., et al.: "Complete Amino Acid Sequence and Identification of the Platelet GPIb Binding Site of Jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Protein Isolated from Bothrops jararaca." J. Biol. Chem.271. 10635-10639 (1996)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Fujimura, Y., et al: "Snake Venom Proteins Modulating Interaction Between von Willebrand Factor and Platelet Glycoprotein Ib(Review)." Thromb. Haemost.76. 633-639 (1996)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Hamako. J., et al.: "Purification, and Characterization of Bitiscetin, a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein from Bitis aritans Snake Venom." Biochem. Biophys. Res. Commun.226. 273-279 (1996)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Matsui, T., et al.: "Interaction of von Willebrand Factor with the Extracellular Matrix and Glycocalicin under Static Conditions." J. Biochem.121. 376-381 (1997)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Matsui, T., et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Bitiscetin, a Novel von Willebrand Factor Modulator Protein, Purified from Snake Venom of Bitis arietans." Res. Commun. Cell Mol. Biol.(in press). (1997)

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      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Katayama, M. et al.: "Eibronectin and 130-kDa Molecule Complex Mimics Snake Yenom Botrocetin-like Structure Potentially Modulating Association betwwen von Willebrand Factor and Vascular Vessel Wall." J. Biochem.117. 331-338 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Shima, M. et al.: "ABO Blood Group Genotype and Plasma von Willebrand Factor in Normal Individuals." Vox Sang.68. 236-240 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Fujimura, Y. et al.: "Isolation and Characterization of jararaca GPIb-BP, a Snake Venom Antagonist Specific to Platelet Glycoprotein Ib." Thromb. Haemost.74. 743-750 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Kawasaki, T. et al.: "Tokaracetin, a New Platelet Antagonist That Binds to Platelet Glycoprotein Ib and Inhibits von Willebrand Factor- dependent Shear- induced Platelet Aggreqation." Biochem. J.308. 947-953 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Taniuchi, Y. et al.: "Flavocetin-A and B, Two High Molecular Mass Glycoprotein Ib Binding Proteins with High Affinity, Purified from Trimeresurus flavoviridis Venom, Inhibit the Platelet Aggreqation at High Shear Stress." Biochim. Biophys. Acta. 1224. 331-338 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] 藤村吉博 他: "von willebrand因子と血小板の結合反応を制御する蛇毒蛋白質の構造と機能(総説)" 日本血栓止血学会会誌. 6. 237-251 (1995)

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      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Usami, Y., et al.: "Primary Structure of Alboaggreqin- B Purified from the Venom of Trimeresurus albolabris." Biochim. Biophys. Res. Commun.(in press). (1996)

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  • [文献書誌] Kawasaki, T., et al.: "Complete Amino Acid Sequence and Identification of the Platelet GPIb Binding Site of Jararaca GPIb-BP, a Snake Venom Protein Isolated from Bothrops jararaca." J. Biol. Chem.(in press). (1996)

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  • [文献書誌] Nishida,S.et al.: "Purification and Characterization of Bothrombin,a Fibrinogen-Clotting Serine Protease from the Venom of Bothrops jararaca." Biochemistry. 33. 1843-1849 (1994)

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  • [文献書誌] Usami,Y.et al.: "A 28kDa-protein with Disintegrin-like Structure(Jararhagin-C)Purified from Bothrops jararaca Venom Inhibits Collagen-and ADP-induced Platelet Aqqregation." Biochem.Biophys.Res.Commun.201. 331-339 (1994)

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  • [文献書誌] Miura,S.et al.: "Strutural Elements Intluencing von Willebrand Factor(vWF)Binding Affinity for Platelet Glycoprotein Ib within a Dispase-digested vWF Fragment." Blood. 84. 1553-1558 (1994)

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      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Katayama,M.et al.: "Fibronectin and 130-kDa Molecule Complex Mimics Snake Venom Botrocetin-like Structure Potentially Modulating Association between von Willebrand Factor and Vascular Vessel Wall." J.Biochem.(in press). (1995)

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  • [文献書誌] Fujimura,Y.et al.: "Isolation and Characterization of Bothrops jararaca GPIb-BP,a Snake Venom Antagonist Specific to Platelet Glycoprotein Ib." Thromb.Haemostas.(in press). (1995)

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  • [文献書誌] Kawasaki,T.et al.: "Tokaracetin,a New Platelet Antigonist That Binds to Platelet Glycoprotein Ib and Inhibits von Willebrand Factor-dependent Shear-induced Platelet Aggregation." Biochem.J.(in press). (1995)

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      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Fujimura,Y.and Titani,K.: "Haemostasis and Thrombosis,Third Edition Volume 1(Bloom,A.L.,Forbes,C.D.,Thomas,D.P.,and Tuddenham,E.G.D.Ed.)" Churchill Livingstone,Edinburgh,717 (1994)

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公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

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