研究課題/領域番号 |
06454666
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研究種目 |
基盤研究(B)
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配分区分 | 補助金 |
応募区分 | 一般 |
研究分野 |
生物物理学
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研究機関 | 姫路工業大学 |
研究代表者 |
斉藤 肇 姫路工業大学, 理学部, 教授 (30100150)
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研究分担者 |
辻 暁 姫路工業大学, 理学部, 助手 (60227387)
内藤 晶 姫路工業大学, 理学部, 助教授 (80172245)
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研究期間 (年度) |
1994 – 1996
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研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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配分額 *注記 |
6,100千円 (直接経費: 6,100千円)
1996年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1995年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1994年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
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キーワード | 膜蛋白質 / 固体高分解能NMR / 3次元構造 / バクテリオロドプシン / ダイナミックス / 膜タンパク質 / 三次元構造 / レチナ-ル / バクテリオオプシン |
研究概要 |
主として[3-^<13>C]Ala標識バクテリオロドプシン(bR)を対象に、固体高分解能NMRによる解析を行い、以下の結果を得た。 (1)部位および位置特異的^<13>C信号帰属:^<13>C信号を膜貫通ヘリックス、ループ、N-またはC-末端部位などへの部位特異的帰属、さらに、野生株と変異株の比較、限定分解、pH適定、^<13>C標識合成フラグメントの比較から、位置特異的な帰属の50%を終了した。また、C-末端残基のαヘリックス構造の存在を指摘した。 (2)高次構造の温度変化:10mM NaCl存在下では-20度以下で大幅な線幅のひろがりがみられた。これは室温で見られる10^2秒^<-1>の速度定数の分子鎖の揺らぎが、カチオンと脂質頭部静電的な相互作用による脂質分子の運動の凍結により、タンパク質骨格の揺らぎがirregularに凍結するためであることがわかった。 (3)レチナ-ル、脂質、界面活性剤との相互作用:bRからレチナ-ルを除去したbOの大きなスペクトルに変化は、レチナ-ル-タンパク質の相互作用に基づくコンホメーション変化による。またループ部位に10^<-4〜>10^<-5>秒の時間尺度の揺らぎが誘起された。界面活性剤による脱脂、可溶化にともなう構造変化も検討した。 (4)骨格ダイナミックス:観測部位に応じて時間尺度が10^<-2>秒程度のおそい運動、10^<-4>-10^<-5>秒程度の中間程度の運動が観測できた。C末端部位は10^<-9>秒程度の速いランダム運動のためCP-MASの信号が観測できなかった。
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