• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

DNAプローブとPCR法によるBacteroides fragilis迅速診断法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 06557020
研究種目

試験研究(B)

配分区分補助金
研究分野 細菌学(含真菌学)
研究機関徳島大学

研究代表者

大西 克成  徳島大学, 医学部, 教授 (10037400)

研究分担者 鴨頭 峻  大塚製薬(株), 新薬開発部, 部長補佐
秋本 茂 (秋元 茂)  徳島大学, 医学部, 助教授 (10159337)
研究期間 (年度) 1994 – 1995
研究課題ステータス 完了 (1995年度)
配分額 *注記
3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
1995年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1994年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
キーワードBacteroides fragilis / DNAプローブ / PCR / 迅速診断法 / ノイラミニダーゼ / DNA診断 / 感染症 / rRNAスペーサー領域
研究概要

Bacteroid fragilis YCH46株とTAL2480株のノイラミニダーゼ構造遺伝子nanHから、これら2株間で保存されている塩基配列を選択し、4種類のPCRプライマーとオリゴヌクレオチドプローブPH1を作製した。これらのPCRプライマーを用いて、nested PCRを行った結果、その検出限界は10CFUのB.fragilisと10fgのchromosomal DNAであった。59株のB.fragilisとB.fragilis以外の45菌種45株を用いた特異性の検定では、firstプライマーセットを用いた場合、B.vulgatusに偽陽性バンドを認めたのみであった。このような偽陽性を除外するため、3'末端ジゴケシゲニン標識オリゴヌクレオチドプローブPH1を用いて、それぞれのPCR増幅産物に対してdot blot hybridizationを行った。この結果、B.fragilisのPCR増幅産物では全て陽性スポットを検出したが、B.fragilis以外の45菌種45株では全て陰性であり、first PCRで偽陽性を示したB.vulgatusを除外することができた。また、B.fragilisによる菌血症モデルマウスを作成し、その血液検体を用いてPCR-dot blot hybridizationを行った。その結果、血液検体中に存在する20CFUのB.fragilisを検出することができ、nanH遺伝子を用いたPCR-dot blot hubridization法は臨床応用可能なB.fragilisの迅速診断法であると考えられた。また、B.fragilisの新たな病原因子としてfibrinogenのα鎖を特異的に分解するプロテアーゼの精製に成功した。さらに、B.fragilisのロイシン合成遺伝子leuBの塩基配列の決定、Bacteroides属における16S-23S rRNAスペーサー領域の解析を行い、新たなB.fragilisの迅速診断法への可能性を示した。

報告書

(3件)
  • 1995 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (23件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (23件)

  • [文献書誌] Ono,T.: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniforms." FEMS Microbiology Letters. 121. 153-158 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Akimoto,S.: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochemical and Biophysical Research Communications. 203. 914-921 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sarker,M.R.: "Molecular cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiology and Immunology. 39. 19-25 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sarker,M.R.: "Nucleotide sequence of the gene encoding β-isopropylmalate dehydrogenase (leuB) from Bacteroides fragilis." Microbiology and Immunology. 39. 525-529 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yong Chen.: "Purification and characterization of a fibrinogen-degrading protease in Bacteroides fragilis strain YCH46." Microbiology and Immunology. 39. 967-977 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kuwahara,T.: "Detection of Bacteroides fragilis by PCR assay targeting the neuraminidase-encoding gene." Letters in Applied Microbiology. (in press). (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 秋本 茂、大西克成: "エッセンシャル微生物学 第4版" 医歯薬出版株式会社, 4 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ono, T., et al: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniformis." FEMS Microbiol.Lett.121. 153-158 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Akimoto, S., et al: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 914-921 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sarker, M.R., et al: "Molecular cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiol.Immunol.39. 19-25 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sarker, M.R., et al: "Nucleotide sequence of the gene encoding beta-isopropylmalate dehydrogenase (leuB) from Bacteroides fragilis." Microbiol.Immunol.39. 525-529 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Young Chen., et al: "Purification and characterization of a fibrinogen-degrading protease in Bacteroides fragilis strain YCH46." Microbiol.Immunol.39. 967-977 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kuwahara, T., et al: "Detection of Bacteroides fragilis by PCR assay targeting the neuraminidase-encoding gene." Lett.Appl.Microbiol.(in press). (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1995 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ono,T.: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniformis." FEMS Microbiology Letters. 121. 153-158 (1994)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Akimoto,S.: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochemical and Biophysical Research Communications. 203. 914-921 (1994)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Sarker,M.R.: "Molecular cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiology and Immunology. 39. 19-25 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Sarker,M.R.: "Nucleotide sequence of the gene encoding β-isopropylmalate dehydrogenase (1euB) from Bacteroides fragilis." Microbiology and Immunology. 39. 525-529 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Yong Chen.: "Purification and characterization of a Fibrinogen-degrading protease in Bacteroides fragilis strain YCH46." Microbiology and Immunology. 39. 967-977 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Kuwahara,T.: "Detection of Bacteroides fragilis by PCR assay targeting the neuraminidase-encoding gene." Letters in Applied Microbiology. (in press).

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] 秋元 茂、大西克成: "エッセンシャル微生物学" 医歯薬出版株式会社, 4 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Ono,T.: "Cloning and expression of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase gene in Escherichia coli and Bacteroides uniformis" FEMS Microbiol.Lett.121. 153-158 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Akimoto,S.: "Complete sequence of the Bacteroides fragilis YCH46 neuraminidase-encoding gene." Biochem.Biophys.Res.Commun.203. 914-921 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Sarker.M.F.: "Molecular cloning of the leuB gene from Bacteroides fragilis by functional complementation in Escherichia coli." Microbiol.Immunol.39. 19-25 (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

URL: 

公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi