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アデノウイルス一過性発現ベクターによるサイトカインと情報伝達分子の作用機構の研究

研究課題

研究課題/領域番号 06557023
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分試験
研究分野 免疫学
研究機関東京大学

研究代表者

横田 崇  東京大学, 医科学研究所, 客員教授 (50134622)

研究分担者 倉田 寛一  東京大学, 医科学研究所, 客員研究員 (90215038)
村松 正明  東京大学, 医科学研究所, 客員研究員 (50230008)
渡辺 すみ子  東京大学, 医科学研究所, 助手 (60240735)
斉藤 泉 (斎藤 泉)  東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)
新井 賢一  東京大学, 医科学研究所, 教授 (00012782)
研究期間 (年度) 1994 – 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
9,400千円 (直接経費: 9,400千円)
1996年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1995年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
1994年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
キーワードアデノウイルスベクター / 遺伝子治療 / サイトカイン / サイトカインレセプター / シグナル伝達分子 / サイトカイン・レセプター / シグナル伝達 / T細胞 / GM-CSFレセプター / LacZ / プロモーター / GM-CSF / HeLa細胞
研究概要

本研究では当初の計画の通りアデノウイルスベクター(AdV)を用いて以下の検討を行なった。
(1)各種サイトカイン発現アデノウイルスベクターの作製とin vitroおよびin vitro感染実験
CAGプロモーターの支配下に各種サイトカイン(hGM-CSF,mGM-CSF,mIL-2,mIL-4,mIFN-gなど)を発現するベクターを作製した。COS細胞など細胞株における発現パターンを検討し,MOI依存的一過性発現パターンを認めた。また,マウスに静脈注射後,第3-7日目をピークに肝臓>脾臓>その他の臓器の発現を認めた。
(2)各種サイトカインレセプター発現ベクターの作製と遺伝子発現効率の検討
ヒトGM-CSFレセプターaおよびb鎖,b鎖の変異分子などの発現AdVを作製した。これらのベクターは付着性細胞に高レベルに外来性レセプター分子を発現したが,Tリンパ球など非付着性細胞に対しては低レベルの発現しか認められなかった。
(3)各種サイトカインレセプター発現ベクターの作製とシグナル伝達の検討
上記のヒトGM-CSFレセプター発現ベクターをNIH3T3細胞に感染させ,サイトカイン応答性の獲得を3H-thymidine取り込みやc-fos-luciferase assayにより検討したところ,ヒトGM-CSF依存性に一部反応性が認められる傾向があったが,感染による細胞変性などばらつきが大きかった.
(4)AdVによる免疫反応の惹起と疾患治療モデルの作製
AdVのin vivo投与により,高濃度ではdose-dependentに早期死亡した。また,数種のサイトカイン発現ベクターにより数日後の死亡を認め,現在,臓器変化,抗ウイルス免疫反応の強度などを検討している。また,以上の結果をもとに造血幹細胞や腫瘍細胞の増殖・分化を外来性レセプター発現ベクターにより制御するシステムの研究を続行している。

報告書

(4件)
  • 1996 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1995 実績報告書
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (22件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (22件)

  • [文献書誌] Muto,A.,Yokota,T.et al: "The β subunit of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor forms a homodimer and is acrivated via association with the α subunit." J.Exp.Med.183. 1911-1916 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Itoh,T.,Yokota,T.et al.: "Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor provokes RAS activation and transcription of c-fos through different modes of signaling." J.Biol.Chem.271. 7587-7592 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Watanabe,S.,Arai,K.et al: "JAK2 is essential for activation of c-fos and myc promoters and cell proliferation through the human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) receptor in BA/F3 cells." J.Biol.Chem.271. 12681-12686 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Watanabe,S.,Arai,K.: "Roles of the JAK-STAT systems in signal transduction via cytokine receptors." Current Opinion.Biotech.6. 587-596 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Muto, A., Yokota, T.et al: "The beta subunit of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor forms a homodimer and is acrivated via association with the alpha subunit." J.Exp. Med.183. 1911-1916 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Itoh, T., Yokota, T., et al.: "Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor provokes RAS activation and transcription of c-fos through different modes of signaling" J.Biol. Chem.271. 7587-7592 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Watanabe, S., Arai, K., et al.: "JAK2 is essential for activation of c-fos and myc promoters and cell proliferation through the human granulocyte-macrophage colony -stimulating factor (GM-CSF) receptor in BA/F3 cells.19GC03 : J.Biol. Chem." 271. 12681-12686 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Watanabe, S., Arai, K., et al.: "Roles of the JAK-STAT systems in signal transduction via cytokine receptoes." Current Opinion. Biotech.6. 587-596 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Muto,A.,Yokota,T.et al: "The β subunit of human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor receptor forms a homodimer and is acrivated via association with the α subunit." J.Exp.Med.183. 1911-1916 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Itoh,T.,Yokota,T.et al.: "Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor provokes RAS activation and transcription of c-fos through different modes of signaling." J.Biol.Chem.271. 7587-7592 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Watanabe,S.,Arai,K.et al: "JAK2 is essential for activation of c-fos and myc promoters and cell proliferation through the human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) receptor in BA/F3 cells." J.Biol.Chem.271. 12681-12686 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Watanabe,S.,Arai,K.: "Roles of the JAK-STAT systems in signal transduciton via cytokine receptors." Current Opinion.Biotech.6. 587-596 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kinoshita, T., et al.: "Suppression of apoptotic death in hematopoietic cells by signalling through the IL-3/GM-CSF receptors" EMBOJ.14. 266-275 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Watanabe, S.,et al.: "Granulocyte-macrophage colony stimulation factor dependent replication of polyoma virus replicon in hematopoietic cells: Analyses of receptor signals for replication and transcription" J. Biol. Chem.270. 9615-9621 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Watanabe, S.,et al.: "Characterization of cis-regulatory elements of the c-myc promoter responding to human GM-CSF or mouse IL-3 in mouse proB cell line BA/F3 cells expressing the human GM-CSF receptor." Mol. Biol. Cell.6. 627-636 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Nishijima, I., et al.: "A human GM-CSF receptor expressed in transgenic stimulates proliferation and differentiation of nemopoietic progenitors to all lineages in response to human GM-CSF." Mol. Biol. Cell.,. 6. 627-508 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Hirokazu Kurata: "Differential expression of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and IL-3 receptor subunits on human CD34+ cells and leukemic cell lines" J. Allergy and Clinical Immunology. 96. 1083-1099 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] 倉田寛一: "遺伝子導入法 アデノウルスペクター" 診断と治療. 83. 655-664 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] H.Kurata,et al: "Adenovirus-Mediated Gene Transfer:Application to The Hematopoietic System" Leukemia. (in press). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Masuda.E,Yokota.T,Arai,K, et al: "GM-CSF,IL-3,IL-4 and IL-5:Regulation of genes and signal transduction by their receptors" Moleculsr Biology of Hematopoiesis. 3. 503-516 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Arai.K,Yokota.T,et al: "Hematopoietic gronth.factons on human chromosome5:genes and their receptors." J.Cell.Biochem.(in press).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Nakagawa.Y,Yokoda.T,et al.: "Structure of the gene encoding the α suburit of the human granvlocyte macrophage colony stimulatig factor receptr.eptois." J.Biol Chem.269. 10905-10912 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

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公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

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