| 研究課題/領域番号 |
06557059
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| 研究種目 |
試験研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
内分泌・代謝学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
松沢 佑次 (松沢 祐次) 大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)
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| 研究分担者 |
金田 安史 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (10177537)
野崎 秀一 大阪大学, 医学部, 助手 (30252646)
山下 静也 大阪大学, 医学部, 助手 (60243242)
竹村 芳 大阪大学, 医学部, 講師 (00161240)
河田 純男 大阪大学, 医学部, 助教授 (90183285)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
11,300千円 (直接経費: 11,300千円)
1995年度: 2,800千円 (直接経費: 2,800千円)
1994年度: 8,500千円 (直接経費: 8,500千円)
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| キーワード | 家族性高コレステロール血症 / HVJ-liposome法 / 遺伝子治療 |
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| 研究概要 |
LDL受容体遺伝子異常を原因とする家族性高コレステロール血症(FH)に対する遺伝子治療を開発するため、まず、生体組織に直接遺伝子を導入し、効率よく発現するシステムとしてHVJ-リポソーム法を開発した。次に本法を利用して動物成体の肝臓にヒトLDL受容体遺伝子を導入した。ヒトLDL受容体遺伝子を含むHVJ-liposomeを経門脈および経静脈投与し、ラット肝においてLDL受容体mRNAの発現を確認した。また、高コレステロール食負荷ラットにおいて経静脈的遺伝子導入後の血清コレステロール値の変化を経時的に測定し、約20%のコレステロールの低下を認めた。しかしその効果はなお不十分のため、次にベクターの改良により導入発現効率を上げることを目標とした。当初のvector(pMy3)では、大きすぎることやpromotorが肝においてregulationを受ける可能性があったため、chicken β actin promotorを含み、hLDL receptor cDNAを組み込んだ新しいvector (pCL1)を作成した。In vitroにおいてこれらの効率を比較すると、pCL1はpMy3に比較し、Northern blotおよび免疫組織学的検索により明らかに遺伝子導入効率が高いことが確認された。また、pCL1を用いた遺伝子導入により、標識LDLの取り込みの増加が確認された。以上より、HVJ-liposome法を用いたLDL受容体遺伝子導入によるFHの治療法の開発は、その基礎段階が完了したと考えられる。しかし、当法による導入遺伝子発現効率の低さや期間の短さなどの問題点が解決されなかったため、当初の目標であったモデル動物での遺伝子導入発現実験に至らず、今後さらに長期かつ高発現に向けて、EBvirus vectorの開発やneonateへの投与、あるいはretrovirus法との組み合わせなどの工夫を行っていく予定である。
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