| 研究課題/領域番号 |
06557124
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 試験 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
鎌滝 哲也 北海道大学, 薬学部, 教授 (00009177)
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| 研究分担者 |
中山 佳都夫 北海道大学, 薬学部, 助手 (20261323)
横井 毅 北海道大学, 薬学部, 助教授 (70135226)
佐久間 勉 北海道大学, 薬学部, 助手 (30250468)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1996
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| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
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| 配分額 *注記 |
8,300千円 (直接経費: 8,300千円)
1996年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1995年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1994年度: 4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
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| キーワード | 代替法 / P450 / トランスジェニックマウス / CYP3A7 / p53欠損マウス / 細胞発現系 / 肝細胞 / アフラトキシンB_1 / p53欠失マウス / 薬物代謝酵素 / チトクロームP450 / 大量発現系 / N-アセチルトランスフェラーゼ / バキュロウイルス発現系 / in vitro 毒性試験 |
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| 研究概要 |
1.ヒト胎児の主要なP450であるCYP3A7のcDNAを導入したトランスジェニック(Tg)マウスにCYP3A7の基質(薬物)を投与し、その代謝物の血中濃度を測定することにより代替法としての有用性を検討した。すなわち、Tgマウスにミダゾラムを投与し、血清中のミダゾラムの代謝物レベルをHPLCで測定した。その結果、野生型マウスと比べ、ミダゾラムの1'-位水酸化代謝物のレベルは有意に高かった。
2.現在までにP450を安定に発現する培養肝細胞株は得られていない。p53欠損マウスのいくつかの臓器の細胞は形態を維持した状態で長期培養可能であることから、肝細胞についてP450を安定に発現する細胞株の樹立を試みた。すなわち、CYP3A7を導入したTgマウスとp53欠損マウスを交配し、その肝細胞から培養細胞株を樹立した。このTgマウスはマウスメタロチオネインプロモーターの制御下でCYP3A7を発現するため、亜鉛による誘導的発現が可能である。樹立した培養肝細胞において培地に塩化亜鉛を添加することによりCYP3A7mRNAが発現することをノーザンブロット分析で明らかにした。また、CYP3A7の酵素活性を7-プロポキシクマリンを基質として測定したところ、塩化亜鉛を添加したときのみ活性が認められた。これらのことより、CYP3A7を安定に発現する肝細胞株が樹立できたことが示された。この方法を応用すれば、ヒト酵素導入Tgマウスとp53欠損マウスを交配するだけで、目的のヒト酵素を発現する培養細胞株を得ることができ、非常に有用であると考えられる。
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