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コレステロール生合成後段階の阻害剤探索法の開発とその応用

研究課題

研究課題/領域番号 06557135
研究種目

基盤研究(A)

配分区分補助金
応募区分試験
研究分野 医薬分子機能学
研究機関新潟大学

研究代表者

小野 輝夫  新潟大学, 医学部, 教授 (00000927)

研究分担者 熊谷 英敏  新潟大学, 医学部, 助手 (20281008)
榊原 順  新潟大学, 医学部, 助手 (90242403)
藤井 博  新潟大学, 医学部, 助教授 (90165340)
星野 力  新潟大学, 農学部, 助教授 (30165542)
研究期間 (年度) 1994 – 1996
研究課題ステータス 完了 (1996年度)
配分額 *注記
11,200千円 (直接経費: 11,200千円)
1996年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1995年度: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
1994年度: 5,500千円 (直接経費: 5,500千円)
キーワードスクアレン・エポキシダーゼ(SE) / ラノステロール合成酵素(LS) / 酵母トランスフォーマント / 阻害剤 / クローニング / 抗真菌剤 / スクアレン合成酵素(SS) / 生育阻害 / コレステロール / スクアレン / スクアレン・エポキシダーゼ / 動脈硬化 / 高脂血症 / スクリーニング / バイオセンサー / スクアレンエポキシダーゼ
研究概要

哺乳類のコレステロール生合成後段階酵素に対する阻害剤探索法を開発するに当たり、先ずスクアレン・エポキシダーゼ(SE)を標的酵素に検討した。一次スクリーニング法確立の戦略として、酵母にクローニングした哺乳類SEのcDNAを発現ベクターと共に導入し、酵母と哺乳類のSE両方を発現させ、酵母のSE活性のみを酵母SEに特異的な阻害剤テルビナフィンで阻止し、哺乳類SEを利用した生育条件下でカビや放線菌の分泌物及び菌体成分の中に、哺乳類SEに対する阻害剤の候補が存在するかどうかを生育阻害を指標に検討した。また、酵母のSE欠損株を作成し哺乳類SEのcDNAを発現ベクターと共に導入して生育させた酵母の生育阻害を指標にスクリーニングする方法も合わせ検討した。
導入する哺乳類のSEとしてネズミ、マウス、ヒトのcDNAをクローニングし、酵母のトランスフォーマント作成にはネズミ由来のSEを用いた。酵母のSE欠損株の作成にはまだ成功しておらず、暫定的にトランスフォーマント酵母の生育条件の最適化を計る予備実験を行ない、SE阻害アッセイ系の構築としての培養、判定条件を設定した。既知の抗真菌活性物質39薬剤をアッセイに供した結果、15薬剤については1〜0,01μg/mlで生育抑制を示したが、組換体のみに特異的に生育抑制を示すサンプルはなかった。一方、ポジティブコントロールであるNB-598はホストに比べ100倍強い生育抑制を示した。現在まで570サンプルの菌体成分についてのアッセイを終了したが、少なくとも5%以上の生育抑制を示したサンプルは18サンプルあり、組換体のみに特異的に生育抑制を示すサンプルは9サンプル存在したが、何れも生育抑制活性は弱く、これらについては広い濃度を採り、阻害活性を検討中である。

報告書

(4件)
  • 1996 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1995 実績報告書
  • 1994 実績報告書
  • 研究成果

    (24件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (24件)

  • [文献書誌] Nakamura, Y.: "Transcriptional regulation of squalene epoxidase by sterols and inhibitors in Hela Cells" J. Biol. Chem.271. 8053-8056 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] McGee, T. P.: "Degradation of HMG-CoA reductase in endoplasmic reticulm membranes is accelerated as a result of increased susceptibility to proteolysis." J. Biol. Chem.271. 25630-25638 (1996)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanda, T.: "Effect of bile on the intestinal bile-acid binding protein (I-BABP) expression In vivo and in vitro studies." FEBS Lett.384. 131-134 (1996)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nagai, M.: "Localization of the squalene epoxidase gene to human chromosome 8q 24. 23." Genomics. (in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakakibara, J.: "Functional characterization of the promoter region of the human squalene epoxidase." J. Biol. Chem.(in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura, Y.: "Transcriptional regulation of squalene epoxidase by sterols and inhibitors in Hela Cells." J.Biol.Chem.271. 8053-8056 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] McGee, T.P.: "Degradation of HMG-CoA reductase in endoplasmic reticulm membranes is accelerated as a result of increased susceptibility to proteolysis." J.Biol.Chem.271. 25630-25638 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanda, T.: "Effect of bile on the intestinal bile-acid binding protein (I-BABP) expression. In vivo and in vitro studies." FEBS Lett.384. 131-134 (1996)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nagai, M.: "Localization of the squalene epoxidase gene to human chromosome 8q 24.13." Genomics. (in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakakibara, J.: "Functional characterization of the promoter region of the human squalene epoxidase." J.Biol.Chem.(in press). (1997)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1996 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura,Y.: "Transcriptional regulation of squalene epoxidase by sterols and inhibitors in HeLa Cells" J.Biol.Chem.271. 8053-8056 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] McGee,T.P.: "Degradation of HMG-CoA reductase in endoplasmic reticulm membranes is accelerated as a result of increased susceptibility to proteolysis." J.Biol.Chem.271. 25630-25638 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Kanda,T.: "Effect of bile on the intestinal bile-acid binding protein (I-BABP) expression. In vivo and in vitro studies." FEBS Lett.384. 131-134 (1996)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Nagai,M.: "Localization of the squalene epoxidase gene to human chromosome 8q 24.13." Genomics. (in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Sakakibara,J.: "Functional characterization of the promoter region of the human squalene epoxidase" J.Biol.Chem.(in press). (1997)

    • 関連する報告書
      1996 実績報告書
  • [文献書誌] Nakamura,Y.: "Transcriptional regulation of squalene epoxidase by sterols and inhibitors in HeLa Cells." J.Biol.Chem.(in press). (1996)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Sakakibara,J.: "Molecular cloning and expression of squalene epoxidase." J.Biol.Chem.270. 17-20 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Kosuga,K.: "Nucleotide sequence of a cDNA for mouse squalene epoxidase." Biochim.Biophys.Acta. 1260. 345-348 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Nagumo,A.: "purification and characterization of recombinant squalene epoxidase." J.Lipid Res.36. 1489-1497 (1995)

    • 関連する報告書
      1995 実績報告書
  • [文献書誌] Jun Sakakibara: "Molecular cloninig and expression of rat squalene epoxidase" J.Biol.Chem.270. 17-20 (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 榊原,順: "スクアレンエポキシダーゼ-もう一つのコレステロール合成律速酵素-" 蛋白質 核酸 酵素. 39. 1508-1517 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Kenichi Kosuga: "Nucleotide sequence of a cDNA for mouse squalene epoxidase" Biochim.Biophys.Acta. (in press). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Rikio Watanabe: "Molecular cloning of a cDNA encoding a novel fatty acid-binding protein from rat skin" Biochem.Biophys.Res.Commun.200. 253-259 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Katsuyuki Sakai: "Tissue-specific suppression of aortic fatty-acid-binding protein in streptozotocin-induced diabetic rats" Eur.J.Biochem.(in press). (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書

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公開日: 1994-04-01   更新日: 2016-04-21  

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