| 研究課題/領域番号 |
06650924
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物・生体工学
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| 研究機関 | 埼玉工業大学 |
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研究代表者 |
内山 俊一 埼玉工業大学, 工学部, 教授 (80129163)
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| 研究分担者 |
長谷部 靖 埼玉工業大学, 工学部, 講師 (20212144)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1995年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1994年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | バイオセンサ / 酵素増幅 / ヒスタミン測定 / 抗体測定 / 酵素機能転換 / 酵素機能変換 / 酵素増幅法 |
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| 研究概要 |
銅を含有するモノアミンオキシダーゼ(MAO)とジアミンオキシダーゼ(DAO)が弱アルカリ性でヒスタミンなどのイミダゾール環を有するアミン化合物を捕酵素として認識し、アスコルビン酸オキダーゼ活性を発現することを明らかにした。そしてこの反応においてアスコルビン酸はモノデヒドロアスコルビン酸を経由してデヒドロアスコルビン酸になり、ミハエリスーメンテン速度式に基質として従う(Km=0.62mM)ことがわかり、酵素は過酸化水素になることが判明した。MAOの活性部位のESRシグナルの変化からヒスタミンが活性中心の銅に配位して触媒活性に変化が生じたものと結論した。この反応においてヒスタミンは捕酵素として機能するのでアスコルビン酸消費量が増幅され高感度バイオセンサー加えたヒスタミン量と酵素減少量は比例関係にあり、MAO固定化膜を酵素電極に装着した電極が3x10^<-6>M-1x10^<-3>Mのヒスタミンの濃度の測定用バイオセンサとして極めて有用であることが判明した。またMAOやDAOを固定化したガラスビーズを酵素増幅リアクターとして用いるフローインジェクションシステムでバッチ式と同様にヒスタミンのセンシングが可能であり、ヒスタミンの抗体を添加することにより、高感度とは言えないものの新しい原理に基づく抗体のセンシングが可能であることが明らかとなった。なお、銅を含有する他のオキダーゼについても中心金属に対するヒスタミンの配位効果が観察され、酵素の特異性の転換が生じることがわかり、アミン化合物のセンシングへの応用が期待できることが分かったことも本研究における成果であるといえる。
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