| 研究概要 |
初年度は基礎実験として,TCR・γ鎖のVγ・Jγ-regionのそれぞれ12ケと3ケのsegmentに対して,Algaraら(Diagn Mol Pathol 3:275,1994)の方法に準じてVγに9ケとJγに3ケのprimerを設定し,さらにパラフィン切片に適合するように新たにinnerprimerをJγ側に作製したsemi-nested PCR法を試作した.その結果,33例の皮膚T細胞性リンパ腫のうち15例において陽性所見が得られた.引き続いて次年度は陽性となった1症例に対して,そprimersの中の有効なprimerの組み合わせを同定し得た1症例に対して,その有効なprimerによりパラフィン切片上でTCR・γ鎖のPCR増幅を行ない,さらに同一切片上でprimerの増幅する間に位置するoligonucleotideを標識してIn situ同定を行なった.DAB発色,alkaliphosphatase発色のいずれでも核内にドット状の陽性所見が得られた(研究成果の1).
また,皮膚のT細胞性リンパ腫でありながら臨床的に明らかな自然消退現象のため偽リンパ腫とされてきた4例について電子顕微鏡的・免疫酵素組織化学的・分子遺伝学的検索を行なった.その結果リンパ球そのものはclonalな増殖を示しながら,cataclysmic apo・ptosis(Majno:Am J Pathol 146:3,1995)により自然消退現象が引き起こされ,histologically malignant,clinically benignな病態を形成していたことを明らかにした(研究成果の2,3).さらに,このようなapoptosisには不全型があることを14歳まで消退しなかったinfantile digital fibormatosisの検索にて明らかにした(研究成果の4).
今後の方針としてtemperature gradient gel electropheresis(TGGE),denaturing GGEの手法を駆使し,微小パラフィン検体のPCR法での陽性率の上昇を目指している.
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