原発性胆汁性肝硬変における免疫応答の解析

• 研究課題/領域番号: 06670488
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 内科学一般
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 石橋 大海 九州大学, 医学部, 助教授 (80127969)
• 研究分担者: 林田 一洋 九州大学, 医学部, 助手 (60180981) ; 中村 稔 九州大学, 医学部, 助手 (40217906) ; 工藤 二郎 九州大学, 医学部, 助手 (90148940)
• 研究期間 (年度): 1994 – 1995
• 研究課題ステータス: 完了 (1995年度)
• 配分額: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円); 1995年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円); 1994年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: 原発性胆汁性肝硬変 / 自己免疫性疾患 / 免疫グロブリン遺伝子 / HLA / T細胞 / T細胞エピトープ / molecular mimicry / 免疫応答 / 自己抗体 / エピトープ

研究概要

1.抗ミトコンドリア(PDC)抗体遺伝子の決定ならびに抗体産生Bリンパ球の由来の解析
PBC患者より樹立した抗ミトコンドリア(PDC, OGDC)抗体産生B細胞株よりmRNAを精製し, cDNAを作成した.このcDNAより免疫グロブリンIgV geneに特異的なprimerを用いてIg遺伝子をPCR法を用いて増幅後,増幅されたIg遺伝子をplasmid vectorにクローニングし,その塩基配列を決定し,既知の免疫グロブリン遺伝子ファミリーと比較した.その結果,抗ミトコンドリア(PDC, OGDC)抗体に特異的な遺伝子ファミリーの使用はなく,抗原で刺激されたBリンパ球がクローナルに増殖した可能性を明らかにした.
2.自己抗原(PDC-E2)特異的T細胞のクローニングとT細胞エピトープの解析
PBC患者末梢血を自己抗原提示細胞と各種ミトコンドリア抗原(PDC, OGDCおよびPDC-E2コンポーネントを網羅する合成ペプチド)の存在下で培養し,ミトコンドリア抗原で刺激を繰り返すことによってミトコンドリア抗原特異的T細胞クローンを樹立した.得られたT細胞クローンについてT細胞エピトープ・マッピングを行った.その結果,T細胞エピトープもBリンパ球の近傍に存在し, minimmum epitopeはペプチドPDC-E2 (163-176)であることを明らかにした.このT細胞エピトープの各々のアミノ酸を他のアミノ酸と置換したペプチドでT細胞クローンを刺激することにより, EXDK配列がMHCあるいはT細胞レセプターとの結合に必須の部位であることを明らかにした.さらに,T細胞クローンのひとつが大腸菌のPDC-E2に反応したことにより,T細胞による認識においてもmolecular mimicryが存在し, PBCの発症にも大腸菌が関与している可能性があることを初めて明らかにした.
PBC患者のHLAの検索
PBC患者48名のHLA-DR, DQ, DP座位を336の健常者を対照として,SSOP法によってDNAタイピングを行った.その結果, PBCの疾患感受性はHLA-DRB1 locusによって,一方, PBCへの疾患抵抗性はHLA-DQ locusによって制御されている可能性を明らかにした.

研究成果

• [文献書誌] Mukai, T., Kimura, A., Ishibashi, H., Sasazuki, T., Sata, M., Maruyama, T., Sakai, H., Niho, Y.: "Association of HLA-DRB1^*0803 and ^*1602 with the susceptibility to primary biliary cirrhosis." International Hepatolology Communication. 3. 207-212 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Shimoda, S., Nakamura, M., Ishibashi, H., Hayashida, K., Niho, Y.: "HLA DRB4 0101-restricted imunodominant T cell autoeitope of pyruvate dehydrgenase complex in primary biliary cirrhosis. -The first evidence of molecular mimicry in human autoimmune diseases." Journal of Experimental Medicine. 181. 1835-1845 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Fukushima, N., Nakamura, M., Matsui, M., Ikematsu, H., Koike, K., Ishibashi, H., Hayashida, K., Niho, Y.: "Establishment and structural analysis of human monoclonal antibody to E2 component of 2-oxoglutarate dehydrogenase complex generated from a patient with primary biliary cirrhosis." International Immunology. 7. 1047-1055 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nakamura, M., Ishibashi, H., Matsui, M., Shimoda, S., Hayashida, K., Koike, K., Niho, Y.: "Peripheral B lymphocyte repertoire to mitochondrial antigen in primary biliary cirrhosis. -positive correlation between the disease activity and the frequency of circulating B lymphocytes specific for pyruvate dehydrogenase complex." Autoimmunity. 21. 253-262 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Mukai, T., Kimura, A., Ishibashi, H., Sasazuki, T., Sata, M., Maruyama, T., Sakai, H., Niho, Y.: "Association of HLA-DRB1^* 0803 and ^*1602 with the susceptibility to primary biliary cirrhosis." Int. Hepatol Commun. 3. 207-212 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Shimoda, S., Nakamura, M., Ishibashi, H., Hayashida, K., Niho, Y.: "HALA DRB4 0101-restricted immunodominant T cell autoepitope of pyruvate dehydrogenase complex in primary biliary cirrhosis.-The first evidence of molecular mimicry in human autoimmune diseases." J.Exp. Med.181. 1835-1845 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Fukushima, N., Nakamura, M., Matsui, M., Ikematsu, H., Koike, K., Ishibashi, H., Hayashida, K., Niho, Y.: "Establishment and structural analysis of human monoclonal antibody to E2 component of 2-oxoglutarate dehydrogenase complex generated from a patient with primary biliary cirrhosis." International Immunology. 7. 1047-1055 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nakamura, M., Ishibashi, H., Matsui, M., Shimoda, S., Hayashida, K., Koike, K., Niho, Y.: "Peripheral B lymphocyte repertoire to mitochondrial antigen in primary biliary cirrhosis. -positive correlation between the disease activity and the frequency of circulating B lymphocytes specific for pyruvate dehydrogenase complex." Autoimmunity. 21. 253-262 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ichiki, Y., Shimoda S., Matsui M., Hayashida K., Nakamura M., Inoue T., Hirata Y., Ishibashi H.: "A case of primary biliary cisshosis (CAH-PBC mixed type) for which cyclosporine was transiently effective." Acta Hepatol Jpn. 36. 386-391 (1995)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Muraki, T., Kimura, A., Ishibashi, H., Sasazuki, T., Sata, M., Maruyama, T., Sakai, H., Niho, Y.: "Association of HLA-DRB1^*0803 and ^*1602 with the susceptibility to Primary biliary cirrhosis." International Hepatolology Communication. 3. 207-212 (1995)
• [文献書誌] Shimoda, S., Nakamura, M., Ishibashi, H., Hayashida, K., Niho, Y.: "HLA DRB4 0101-restricted imunodominant T cell autoeitope of pyruvate dehydrgenase complex in primary biliary cirrhosis. -The first evidence of molecular mimicry in human autommune diseases." Journal of Experimental medicine. 181. 1835-1845 (1995)
• [文献書誌] Fukushima, N., Nakamura, M., Matsui, M., Ikematsu, H., Koike, K., Ishibashi, H., Hayashida, K., Niho, Y.: "Establishment and structural analysis of human monoclonal antibody to E2 component of 2-oxoglutarate dehydrogenase complex generated from a patient with primary biliary cirrhosis." International Immunology. 7. 1047-1055 (1995)
• [文献書誌] Nakamura, M., Ishibashi, H., Matsui, M., Shimoda, S., Hayashida, K., Koike, K., Niho, Y.: "Peripheral B lymphocyte repertoire to mitochondrial antigen in primary biliary cirrhosis. -positive correlation between the disease activity and the frequency of circulating B lymphocytes specific for pyruvate dehydrogenase complex." Autommunity. 21. 253-262 (1995)
• [文献書誌] Mukai,T.,Kimura,A.,Ishibashi,H.,Sasazuki,T.,Sata,M.,Maruyama,T.,Sakai,H.,Niho,Y.: "Association of HLA-DRB1^*0803and^*1602with the susceptibility to primary biliary cirrhosis." Int.Hepatol.Commun. (in press). (1995)
• [文献書誌] Shimoda,S.,Nakamura,M.,Ishibashi,H.,Hayashida,K.,Niho,Y.: "HLA DRB40101-restricted imunodominant T cell autoeitope of pyruvate dehydrgenase complex in primary biliary cirrhosis.-The first evidence of molecular mimicry in human autoimmune diseases." J.Exp.Med.(in press). (1995)