| 研究課題/領域番号 |
06670544
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
房本 英之 大阪大学, 医学部, 助教授 (90124776)
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| 研究分担者 |
三田 英治 大阪大学, 医学部附属病院, 医員
佐々木 裕 大阪大学, 医学部, 助手 (70235282)
笠原 彰紀 大阪大学, 医学部, 助手 (70214286)
林 紀夫 大阪大学, 医学部, 講師 (00144478)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1995年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1994年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
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| キーワード | Fas 抗原 / ヒト Fas リガンド / アポトーシス / C型慢性肝炎 / C型肝炎ウイルス粒子 / HLA抗原 / 細胞障害性T細胞 / NK細胞 / Fas抗原 / ヒトFasリガンド / RT-PCR / C型肝炎ウイルス / ラットFasリガンド / クローニング |
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| 研究概要 |
1)C型肝炎患者血液中のHCV粒子の浮遊密度の解析により、HCV粒子は低密度、高感染性のvirionと、高密度、低感染性の免疫複合体の形態で存在することが判明した。肝炎の病態と両粒子の血中での量比との関連を検討すると、肝障害の進展度、肝炎の鎮静化と免疫複合体の増加が関連していた。
2)高ウイルス量にもかかわらず肝障害の殆ど認められないHCVキャリア例でHLA遺伝子多型を検討すると、特定のHLA-DR型(DR13)が高頻度に認められた。また抗原提示の副シグナルであるB7は、C型肝炎肝組織の壊死領域近傍に発現し、炎症の程度とB7発現の程度は相関していた。ウイルス抗原のT細胞への提示、T細胞の活性化が肝炎の発症、進展に重要であることが示された。
3)C型肝炎組織におけるFas抗原の発現は炎症の程度と相関し、HCV core抗原陽性細胞はFas抗原発現細胞とほぼ同じ分布を示した。これより、HCV感染がFas抗原発現のtriggerとなり、肝炎の程度にFas抗原の発現が関与することが示された。B型肝炎肝組織でも同様に炎症の程度とFas抗原の発現は相関するが,HBV core発現細胞とFas抗原発現細胞の分布は一致せず,B型肝炎においてはサイトカインなどHBV感染以外の因子もFas抗原の発現に関与していると考えられた。
4)ラットFas-リガンドのcDNAを元にプライマーを設定し、1.9kbからなるヒトFas-リガンドcDNAをクローニングした。その結果、Fas-リガンドは281アミノ酸からなり、ラット(278アミノ酸)、マウス(279アミノ酸)のそれよりも長く、アミノ酸レベルでの相同性はそれぞれ76%、77%であった。
5)C型肝炎患者の肝生検標本より浸潤リンパ球を分離し、ヒトFas-リガンドの発現をPCR法にて検出した。すると浸潤リンパ球に陽性のシグナルを認め、同時に検討した肝組織では認めなかった。これより浸潤リンパ球に特異的にFas-リガンドmRNAが発現していることが示された。
6)ヒトFas-リガンドの細胞外ドメインに対するモノクローナル抗体を樹立した。これを用いて肝浸潤リンパ球、末梢血リンパ球でのFas-リガンドの発現を蛋白レベルで検討した。肝浸潤リンパ球ではFas-リガンドの発現が末梢血リンパ球に比べて増強しており、そのphenotypeはCD8陽性、またはCD16陽性細胞が主であった。したがって肝細胞障害のEffectorとしてFas-リガンド陽性のCD8陽性CTL (Cytotoxic T Lymphocyte)またはCD16陽性NK (Natural Killer)細胞が働いていることが明かとなった。
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