| 研究課題/領域番号 |
06670843
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
芳野 信 久留米大学, 医学部, 助教授 (40080569)
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| 研究分担者 |
西依 淳 久留米大学, 医学部, 助手 (30218226)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1995年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1994年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | オルニチントランスカルバミラーゼ / 高アンモニア血症 / 遅発型 / 男子 / 変異 / オルニチントランスカルバミラーゼ遺伝子 / 変異遺伝子 / 発現 / 遅発 / 分子機構 |
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| 研究概要 |
遅発型男子オルニチントランスカルバミラーゼ(OTC)欠損症症例のOTC遺伝子を解析し、5家系6症例に40番コドンのアルギニンがヒスチジンに変化する変異(R40H)および1例に55番コドンのチロシンがアスパラギン酸に変化する変異(Y55D)を発見した。これらの変異OTCを持つ患者の発症が遅い原因を解明する目的で以下の知見を得た。1.それぞれの変異を持つOTCcDNAおよび細菌β-ガラクトシダ-セ遺伝子を組み込んだ発現ベクターをCos1細胞に導入、72時間目にハーベストし、標識OTCcDNAをプローブとしてmRNAの発現レベルを解析したところ、R40H、Y55Dのいづれも野生型OTCのそれと発現レベルには有意差を認めなかった。2.また、同じCos1細胞中に発現したOTC活性(β-ガラクトシダーゼ活性で補正した相対活性)は、野生型に対する相対活性はR40Hは29%、Y55Dは28%(n=3)と低下していた。これらの発現酵素は5回の凍結融解処理後、処理前野生型OTC活性(100%)に対して、R40H変異OTCは5.5%に低下した。いっぽうY55D変異OTCは有意の低下を認めなかった。3.その後に発見された3症例でR40H変異が同定され、うち1例の生検肝でのOTCmRNAレベルは正常対照と有意差を認めなかった。4.他の1例の剖検肝でOTCのL-オルニチン、カルバミルリン酸に対する見かけのKm、pH-活性プロファイルを検討したが、いずれも正常対照と有意差を認めなかった。以上の結果から、R40H変異OTC活性低下の機序は、翻訳以降のタンパクの不安定性によること、また、そのR40HOTCの基質特異性等の酵素学的性状は大きな障害はない事が明らかになった。いっぽう、Y55DOTCの活性低下については今後の検討を要する。5.R40H変異の1家系で変異遺伝子の父娘伝達が遺伝子レベルで証明された。これは、OTC欠損症は母からのみ伝達されるという従来の知見とは異なる新しい知見である。また、この事により、本変異は幼若時に発症する変異よりも、集団中により保存されやすいと考えられる。
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