| 研究課題/領域番号 |
06671406
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
脳神経外科学
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| 研究機関 | 琉球大学 |
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研究代表者 |
宮城 航一 琉球大学, 医学部, 助教授 (60102274)
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| 研究分担者 |
牧野 芳大 琉球大学, 医学部, 助教授 (60039930)
古閑 比佐志 琉球大学, 医学部, 助手 (30221237)
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| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
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| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1995年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1994年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
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| キーワード | gene thcrapy / glioblastoma / HSV thymidine kinase / cell cycle / PCNA / bystander effect / flow cytometry / DNA bistogram / gene therapy / thymidine Rinase / Flow cytometry / retrovirus / gene xherapy / Xthymidine kinase / Brau / retro virus |
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| 研究概要 |
遺伝子導入効率を高める方法の開発を目的に次ぎの基礎実験を行った。1)神経膠腫の細胞周期(PCNA染色陽性率)と遺伝子導入効率が相関するか、細胞周期調節剤を用いて遺伝子導入効率を高めることが可能か。2)bystander effectにギャップ結合が関与しているか、関与しているとすればギャップ結合促進物質は自殺遺伝子療法の治療効果をあげるか。PCNA染色の結果から細胞増殖の盛んな腫瘍細胞でganciclovirの細胞障害性が強いと分かった。すなわち組換えウイルス感染率は増殖期細胞の割合に相関した。細胞周期に作用する物質Trichostatin Aについて検討した。Trichostatinを培養液から除去することにより同期したG0G1,G2M期細胞は細胞周期をS期に移行させることができこれに合わせて組換えレトロウイルス感染を行えばよいと分かった。このことから細胞周期調節剤の使用により治療効果を高めることができる可能性が示唆され、増殖性・細胞周期を考慮した治療計画が必要であると考えた。Bystander effectはヒト神経膠腫細胞とマウス由来のHSVtk陽性パッケージング細胞PG13との間においても認められた。免疫染色でヒト神経膠腫細胞におけるCx43は主として細胞質内に存在し、ウエスタンブロットでその存在は正常線維芽細胞に比べて少なかった。Lucifer yellow-fluorescent dye microinjectionでは隣接する細胞への蛍光色素の移行は少なかった。PG13は蛍光色素の移行を全く認めなかったにもかかわらずヒトグリオーマ細胞との間でbystander effectを示した。したがって細胞表面にCx43の発現が少ないグリオーマ細胞ではギャップ結合だけでbystander effectを充分説明できない結果であった。ギャップ結合作用をもつdexamethasone,β-caroteneは腫瘍細胞増殖抑制効果があるもののbystander effect促進作用を示さず自殺遺伝子療法への応用は今回の実験結果から有効性が期待できないと考えた。
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