| 研究課題/領域番号 |
06671613
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 研究分野 |
泌尿器科学
|
|---|
| 研究機関 | 北里大学 |
|---|
研究代表者 |
小幡 文弥 北里大学, 医療衛生学部, 助教授 (60129236)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1994 – 1996
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1996年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1996年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1995年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1994年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
|
|---|
| キーワード | 腎臓移植 / 浸潤細胞 / クローナリティー / T細胞レセプター / V遺伝子使用頻度 / CDR3多様性 / 移植腎浸潤細胞 / バイオプシー / PCR / 移植腎拒絶反応 |
|---|
| 研究概要 |
本研究の目的は、移植腎拒絶反応に動員された腎浸潤T細胞を回収し、それらが表現しているTCR cDNAの多様性を解析することにより、浸潤T細胞のクローナリティーに関する知見を得ることである。
1.拒絶・摘出腎浸潤T細胞の解析
拒絶・摘出腎からCD25^+活性化T細胞画分を分離し、anchored PCR法を利用したクローニングを行い、無作為に選んだ30〜40個のTCR β cDNA clonesの塩基配列を決定した。その結果、解析した4例中3例において、同一のCDR3配列を有するcDNAクローンの組が多数観察され、オリゴクローナルな浸潤T細胞集団であることがわかった。特に顕著なオリゴクローナリティーを示したそのうちの1例については、さらにsingle cell解析を行って確認した。またこのsingle cell解析からは、オリゴクローンがCD8陽性T細胞であることもわかった。
2.バイオプシー試料を用いた腎浸潤T細胞の解析
バイオプシー試料に含まれる極少数のT細胞からTCR解析を行うため、anchored PCRにより増幅した検体のTCR-cDNAを膜固定化V geneとハイブリダイズさせる方法を確立した。上述の腎摘出症例とは異なる別の腎移植5例について解析した結果、4例において特定のV geneに偏りが見られ、特にそのうちの3例はPBLには見られない顕著な偏りを示し、特定の浸潤T細胞オリゴクローンによる拒絶反応惹起をうかがわせた。さらに、経時的バイオプシー採取を行ったその中の1例については、OKT3投与後にV geneの偏りが減弱したことがわかり、免疫抑制のモニタリングとしての有用性も示唆した。
|
