| 研究課題/領域番号 |
06671746
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(C)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
眼科学
|
|---|
| 研究機関 | 北海道大学 |
|---|
研究代表者 |
小竹 聡 北海道大学, 医学部附属病院, 講師 (00186694)
|
|---|
| 研究分担者 |
吉川 浩二 北海道大学, 医学部, 助手 (00250431)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1994 – 1995
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1995年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1995年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1994年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
|
|---|
| キーワード | ベーチェット病 / ぶどう膜炎 / 連鎖球菌 / クローニング / 免疫反応 |
|---|
| 研究概要 |
ベーチェット病患者由来Streptococcus sanguisから抽出した菌体DNAを制限酵素で切断ののち、λgt11ベクターにクローニングし、作成したライブラリーより、患者血清を一次抗体、抗ヒトIgGおよびIgM抗体を二次抗体とするイムノスクリーニングを行い、得た陽性クローンは、DNAとして約1.5kbpの大きさであり、Western blot法によりDNAの発現する蛋白は分子量33-35kDaであった。この得られたDNAの塩基配列の同定するため、まず単離したDNAのサブクローニングを行い、λgt11ベクターに入った菌体由来DNAを増幅後、EcoRIで切り出し、プラスミドpUC118に挿入し、この後、プライマー伸長法により、全塩基配列を決定した。その結果、1.5kbpの塩基配列の中にATGで始まるふたつのopen reading flame (ORF)と考えられる部分が存在しており、それぞれ590bpと950bpの大きさであった。Western blot法より抗原蛋白は分子量33kDa以上であったが、後者のORFはそのアミノ酸配列から推定して約34kDaの蛋白をコードしていると考えられ、また、16b上流にShine-Dalgarno配列を有していることから、後者のORFが抗原蛋白を発現している可能性が高いと考えられた。そこで下流領域をHindIIIおよびEcoRI CassetteおよびCassette primer【○!R】を用いたPCR法によってcloningし、さらに塩基配列の同定を行った。その結果、下流領域にstop codonが確認でき、抗原を発現していると考えられるopen reading frame (ORF)の全塩基配列が判明した。ORFは2,550bp、849のアミノ酸からなり、分子量は約94,800Daであった。Homology searchでは、ヒト網膜のganglion cellで発現しているhomeobox geneであるBrn-3bと高いhomologyがみられた。
|
