| 研究概要 |
ネオプテリン(Neo)はGTPから誘導されたテトラヒドロビオプテリンの中間代謝産物である.Neoはγ-インターフェロン,ウィルス,微生物等により活性化された単球・マクロファージから産生される.感染症,敗血症,自己免疫疾患,悪性腫瘍,移植後拒絶反応等において血中Neoの上昇が言われている.従来,HPLC法やRTA法により尿中Neoを測定したが,定量操作が煩雑であり且つクレアチニン補正を必要とした.今回,我々はenzyme immunoassayという新しい血清Neo定量法の基礎的検討を実施し,更に基準値を求めた.方法はMerck社製の測定系によった.Neo抗体で被覆したマイクロウェルへ生食水を注ぎ,30分間活性化させた後吸引除去した.次いで,preincubation buffer並びに標準液,コントロール血清,被検血清を加え30分間放置.更にペルオキシダーゼ標識Neoを加え60分間競合結合せしめた.ウェル内の溶液を吸引し,生食水により3回洗浄し,非結合Neoを吸引除去した.基質として2,2´-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),diammonium salt[ABTS]を加え,30分間孵置.反応系は緑色を呈した.その後NaN_3を加え,反応を停止.1時間以内に405/630nm下で吸光度を求め,検量線より被検血清中のNeo値を得た.その結果,最小検出限界:0.9nmol/L.測定範囲:0.9〜200nmol/Lであった.低濃度(11nmol/L),中等度濃度(80nmol/L),高濃度(134nmol/L)の同時再現性はCV6.4〜8.2%.同3濃度の日差再現性はCV7.4〜16.0%であった.同様3濃度被検液へのNeoの添加回収率は92〜100%であった.低・中・高濃度共に16倍希釈まで希釈直線性が示された.健常人199名の血清Neoの基準値は3.1±3.9nmol/Lであり,従来法とほぼ同様であった.以上より,本法は感度,再現性,回収率,希釈直線性共に良好であり,日常検査へ導入し得ることが充分評価された.また今回の成果より今後の研究の為の基準値が決定された.
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